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[求助]
本人想分離小鼠脾臟T淋巴細胞，不知這方法可不可行 已有1人參與
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將小鼠頸椎脫臼處死，70%酒精浸泡10min，無菌條件下剖開小鼠腹腔取脾，用注射器內(nèi)芯或者研棒研磨過100目篩網(wǎng)，Hank’s液沖洗，收集分離的脾細胞懸液，2000r/min離心3min，棄上清。加紅細胞裂解液8mL，混勻脾細胞，靜置5-6min，待紅細胞完全破碎，2000r/min離心3min，棄上清去除紅細胞，Hank’s液洗1-2遍，用RPMI-1640（含10%胎牛血清）重懸細胞，計數(shù)調(diào)整細胞濃度為8-10×106個/mL。得到脾淋巴細胞，采用尼龍毛柱法分離，但是參考數(shù)據(jù)： 樣本：小鼠脾臟（T細胞含量在30-40%，B細胞含量在55-60%） 細胞回收率：13-25% B細胞污染率：小于15% 樣本：大鼠脾臟（T細胞含量在30-35%，B細胞含量在55-65%） 細胞回收率：大于25% B細胞污染率：小于15% 樣本：人或兔外周血 細胞回收率 : 20-30% (人)；25-35% (兔) B細胞污染率：小于5% (人、兔) 回收率太低 可不可以用流式細胞儀對得到的脾淋巴細胞液進行分選，得到T細胞？ |
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3樓2017-06-13 22:26:15
徐州往事
鐵桿木蟲 (正式寫手)
- 應助: 2 (幼兒園)
- 金幣: 6069.1
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- 在線: 108.6小時
- 蟲號: 900173
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- 性別: GG
- 專業(yè): 炎癥、感染與免疫
2樓2015-07-17 15:22:36
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