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含擬南芥基因構(gòu)建的GFP載體農(nóng)桿菌打煙草后無熒光，會是什么原因
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我最近構(gòu)建了一個(gè)載體，是擬南芥一個(gè)基因自身啟動子+該基因CDs+GFP，將這個(gè)質(zhì)粒轉(zhuǎn)入農(nóng)桿菌C58后，打入煙草葉片下表皮，在熒光顯微鏡下觀察，卻沒有熒光出現(xiàn)。想問一下，這可能是什么原因造成的。 補(bǔ)充信息：1、在將農(nóng)桿菌打入煙草前，我鑒定過單菌落，用該基因CDs的引物能夠擴(kuò)出相應(yīng)的片段； 2、我還有另外一個(gè)載體，是35S啟動子+該基因CDs+GFP，同樣打煙草后是可以看到熒光的，而我在構(gòu)建自身啟動子的載體時(shí)，是將35S啟動子切下來，換成自身自動自，CDs+GFP那一段我都沒有動過。 3、構(gòu)建的自身啟動子+該基因CDs+GFP的這個(gè)質(zhì)粒，構(gòu)建好后，我選用了幾個(gè)酶切位點(diǎn)，鑒定構(gòu)建是否正確，當(dāng)時(shí)的酶切后的電泳圖顯示酶切后的條帶是正確的。 |
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gstracy
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2樓2016-06-26 19:38:35
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