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重樓連翹

銀蟲 (正式寫手)

[求助] MTT值太大了,一定是染菌了嗎? 已有2人參與

最近做MTT,測(cè)出來(lái)OD值太大了,1以上接近2,甚至2點(diǎn)多,酶標(biāo)儀,490nm下檢測(cè)。自己在網(wǎng)上看,有說數(shù)值太大,可能是染菌了,怎么判斷染沒染菌呢?在顯微鏡下觀察的時(shí)候沒什么異樣啊,培養(yǎng)液也沒渾濁,細(xì)胞生長(zhǎng)也很正常。我的接種密度是3000每孔,培養(yǎng)4天后檢測(cè),會(huì)是細(xì)胞長(zhǎng)得太密了嗎?還有不同濃度藥物作用拉不開差距,是因?yàn)镺D值太大了嗎?求大神指點(diǎn)迷津,感激涕零。。。。。。
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rego_wang

新蟲 (小有名氣)

【答案】應(yīng)助回帖

★ ★ ★ ★ ★
感謝參與,應(yīng)助指數(shù) +1
重樓連翹: 金幣+5, ★★★★★最佳答案 2015-07-06 15:52:54
要要摸索一下你的細(xì)胞在96孔板里長(zhǎng)4天后會(huì)達(dá)到什么樣的OD值 再設(shè)定最初的鋪板密度!
我也同意樓上的建議,既然要長(zhǎng)4天鋪3000確實(shí)可能多了
5樓2015-07-06 15:41:49
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藍(lán)洋飄雪

木蟲 (小有名氣)

引用回帖:
3樓: Originally posted by 重樓連翹 at 2015-07-06 08:09:15
再給自己頂下啊

我們做MTT時(shí),看有沒有染菌就是找一張報(bào)紙放在板子線面,如果看到報(bào)紙上的字是清晰透亮的,就說明沒有染菌,因?yàn)槿揪,培養(yǎng)液是渾濁的。你培養(yǎng)細(xì)胞的時(shí)間是不是有點(diǎn)長(zhǎng)啊

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人生如茶,不會(huì)苦一輩子,但會(huì)苦一陣子!
18樓2015-08-05 13:26:23
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普通回帖

重樓連翹

銀蟲 (正式寫手)

別沉啊,自己給自己頂下

[ 發(fā)自小木蟲客戶端 ]
人生苦短,該吃吃,該喝喝,該樂樂,開心才好!
2樓2015-07-05 19:27:57
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重樓連翹

銀蟲 (正式寫手)

再給自己頂下啊

[ 發(fā)自小木蟲客戶端 ]
人生苦短,該吃吃,該喝喝,該樂樂,開心才好!
3樓2015-07-06 08:09:15
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yaoxuexuezi

至尊木蟲 (職業(yè)作家)

【答案】應(yīng)助回帖

★ ★ ★ ★ ★
感謝參與,應(yīng)助指數(shù) +1
重樓連翹: 金幣+5, ★★★★★最佳答案 2015-07-06 15:52:47
應(yīng)該是細(xì)胞數(shù)過多的原因,你接種的是什么細(xì)胞?正常情況下多久會(huì)長(zhǎng)滿,這些如果考慮進(jìn)去就知道是什么原因了
,按你的培養(yǎng)周期個(gè)人覺得是細(xì)胞太多了,不知道你檢測(cè)前有看過細(xì)胞飽和度沒
4樓2015-07-06 15:34:52
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重樓連翹

銀蟲 (正式寫手)

引用回帖:
4樓: Originally posted by yaoxuexuezi at 2015-07-06 15:34:52
應(yīng)該是細(xì)胞數(shù)過多的原因,你接種的是什么細(xì)胞?正常情況下多久會(huì)長(zhǎng)滿,這些如果考慮進(jìn)去就知道是什么原因了
,按你的培養(yǎng)周期個(gè)人覺得是細(xì)胞太多了,不知道你檢測(cè)前有看過細(xì)胞飽和度沒

接種的小鼠骨骼肌細(xì)胞,自己沒什么經(jīng)驗(yàn),加MTT之前會(huì)在顯微鏡下看一下,覺得是挺滿的,差不多第3天就能長(zhǎng)得挺滿的。那接種2000?還有OD值超過1數(shù)據(jù)是不是就算無(wú)效數(shù)據(jù)了?是不是OD值下去了藥物的梯度作用才會(huì)表現(xiàn)出來(lái)?謝謝!
人生苦短,該吃吃,該喝喝,該樂樂,開心才好!
6樓2015-07-06 15:56:17
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重樓連翹

銀蟲 (正式寫手)

引用回帖:
5樓: Originally posted by rego_wang at 2015-07-06 15:41:49
要要摸索一下你的細(xì)胞在96孔板里長(zhǎng)4天后會(huì)達(dá)到什么樣的OD值 再設(shè)定最初的鋪板密度!
我也同意樓上的建議,既然要長(zhǎng)4天鋪3000確實(shí)可能多了

那鋪2000?這都還是從10000,5000調(diào)下來(lái)的,一點(diǎn)經(jīng)驗(yàn)也沒有,純手工摸索
人生苦短,該吃吃,該喝喝,該樂樂,開心才好!
7樓2015-07-06 15:58:29
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yaoxuexuezi

至尊木蟲 (職業(yè)作家)

引用回帖:
7樓: Originally posted by 重樓連翹 at 2015-07-06 15:58:29
那鋪2000?這都還是從10000,5000調(diào)下來(lái)的,一點(diǎn)經(jīng)驗(yàn)也沒有,純手工摸索...

做MTT實(shí)驗(yàn),細(xì)胞密度一般不會(huì)超過5000,這還是培養(yǎng)兩天之內(nèi),你養(yǎng)4天所以覺得密度要降才行
8樓2015-07-06 16:22:00
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yaoxuexuezi

至尊木蟲 (職業(yè)作家)

引用回帖:
6樓: Originally posted by 重樓連翹 at 2015-07-06 15:56:17
接種的小鼠骨骼肌細(xì)胞,自己沒什么經(jīng)驗(yàn),加MTT之前會(huì)在顯微鏡下看一下,覺得是挺滿的,差不多第3天就能長(zhǎng)得挺滿的。那接種2000?還有OD值超過1數(shù)據(jù)是不是就算無(wú)效數(shù)據(jù)了?是不是OD值下去了藥物的梯度作用才會(huì)表現(xiàn)出 ...

你可以摸一下細(xì)胞密度,500,1000,2000,3000,看一下培養(yǎng)四天后的OD值是多少,至于藥物梯度是否表現(xiàn)出來(lái),我個(gè)人覺得如果你的OD值太高肯定是表現(xiàn)不出來(lái)的,比如超出了儀器檢測(cè)限度,但也不能說沒有別的情況,比如某些藥物就是梯度不明顯

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9樓2015-07-06 16:25:08
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重樓連翹

銀蟲 (正式寫手)

送紅花一朵
好的,我再試試,謝謝回復(fù)

[ 發(fā)自小木蟲客戶端 ]
人生苦短,該吃吃,該喝喝,該樂樂,開心才好!
10樓2015-07-06 17:20:34
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