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Agilent C18反相柱分析蛋白純度時(shí)，老是出現(xiàn)鬼峰怎么解決？
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Agilent C18反相柱分析蛋白純度時(shí)，老是出現(xiàn)鬼峰怎么解決？ 儀器：Dionex U3000高效液相色譜 柱子：Agilent zorbax 300SB-C18, 4.6 mm × 250 mm, 300 Å 流動(dòng)相A ：0.1% 三氟乙酸水溶液 流動(dòng)相 B：0.1% 三氟乙酸乙腈溶液 線性洗脫：90%A：5%B 到40%A：60%B ，時(shí)間25min，流速為 1.0 ml/min ，梯度變化2%/min 檢測(cè)波長(zhǎng)為：220 nm 柱溫：25°C 平衡：10-20個(gè)柱體積。 目標(biāo)蛋白分子量：非共價(jià)同源二聚體，單體分子量約41kD，二聚體分子量83kD。 圖1是直接以流動(dòng)相代替樣品進(jìn)樣檢測(cè)的結(jié)果，圖2是樣品檢測(cè)結(jié)果，可以看到在18-19min處有明顯的基線波動(dòng)，而且峰型會(huì)發(fā)生變化，這嚴(yán)重影響了樣品純度的分析，請(qǐng)問(wèn)要怎樣才能解決這個(gè)問(wèn)題？ 圖片1.以流動(dòng)相代替樣品進(jìn)樣 圖片2.樣品 |
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