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chenshavs新蟲(chóng) (初入文壇)
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跪求293T細(xì)胞�。�！ 已有2人參與
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| 最近正在進(jìn)行慢病毒包裝，293T細(xì)胞不給力，跪求大神賜點(diǎn)293T細(xì)胞�。。�！ |
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2樓2015-07-09 09:10:31
3樓2015-07-09 09:14:44
【答案】應(yīng)助回帖
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Sf9細(xì)胞生長(zhǎng)條件：27℃、無(wú)需CO2、既可懸浮生長(zhǎng)也可貼壁生長(zhǎng)、培養(yǎng)基SF-900Ⅱ（無(wú)血清）。懸浮培養(yǎng)時(shí)把細(xì)胞在懸浮培養(yǎng)瓶中，要有滾動(dòng)裝置（若無(wú)上述裝置可把培養(yǎng)瓶放在小搖床上<200rpm搖振陪養(yǎng)）。貼壁培養(yǎng)時(shí)可把細(xì)胞在懸浮培養(yǎng)瓶中直接靜置30-60分鐘即可貼壁，傳代時(shí)不用消化，用吸管輕輕吹打即可使細(xì)胞脫落下來(lái)，一般三天傳一次代。 就我個(gè)人經(jīng)驗(yàn)，懸浮培養(yǎng)更方便，細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)也不錯(cuò)。尤其對(duì)剛復(fù)蘇的細(xì)胞最好先進(jìn)行懸浮培養(yǎng)。待細(xì)胞長(zhǎng)滿(mǎn)或需要細(xì)胞時(shí)，用吸管把細(xì)胞吸入離心管中，1000轉(zhuǎn)離心5分鐘，然后棄掉上清，用手指將離心管中的細(xì)胞彈打均勻，加新培養(yǎng)基，吹打均勻即可分到另外一瓶中。原來(lái)瓶中可再加新培養(yǎng)基繼續(xù)搖振陪養(yǎng)。 |
4樓2015-07-09 10:58:23
【答案】應(yīng)助回帖
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1．293T細(xì)胞不宜長(zhǎng)期傳代，細(xì)胞比較容易變老，建議每傳一次代就凍存一部分細(xì)胞，傳代比例以1：3——1：4為宜。像樓上1：20傳代雖然可以減少傳代次數(shù)，但細(xì)胞缺少相互作用，生長(zhǎng)會(huì)比適宜密度的時(shí)候慢，而且很容易老化． ２．用于包裝病毒或者轉(zhuǎn)染的細(xì)胞應(yīng)該用代數(shù)較早生長(zhǎng)旺盛，胞體飽滿(mǎn)狀態(tài)好的．特別是應(yīng)該用gelatin或者多聚賴(lài)氨酸鋪底，一方面細(xì)胞在操作過(guò)程中不易成片漂起，另一方面基質(zhì)成分有利于細(xì)胞帖附生長(zhǎng)． ３．胰酶作用完全有利于下一代生長(zhǎng)，不要心急將細(xì)胞吹起，而是輕微晃動(dòng)培養(yǎng)瓶細(xì)胞逐漸下來(lái)的時(shí)候最好． ４．293T對(duì)L-glu要求不高，２mM就行． |
5樓2015-07-10 09:51:55
6樓2015-07-10 12:58:31
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