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拜托 拜托啦~~~用紫外分光光度法測(cè)試水中蛋白質(zhì)含量 已有1人參與
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紫外分光光度法測(cè)試水中蛋白質(zhì)含量，有哪位高人測(cè)過(guò)的。求指教    |
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【答案】應(yīng)助回帖
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感謝參與，應(yīng)助指數(shù) +1
雯雯123321: 金幣+5 2015-07-22 20:41:16
感謝參與，應(yīng)助指數(shù) +1
雯雯123321: 金幣+5 2015-07-22 20:41:16
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一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康? 學(xué)習(xí)紫外分光光度法測(cè)定蛋白質(zhì)含量的原理; 掌握紫外分光光度法測(cè)定蛋白質(zhì)含量的實(shí)驗(yàn)技術(shù); 掌握紫外分光光度計(jì)的使用方法并了解此儀器的主要構(gòu)造。 二、實(shí)驗(yàn)原理 蛋白質(zhì)分子中含有酪氨酸、色氨酸及苯丙氨酸殘基，它們的結(jié)構(gòu)中具有共軛雙鏈，對(duì)紫外光有吸收作用，其最大值在280nm波長(zhǎng)處。在此波長(zhǎng)附近， 蛋白質(zhì)溶液的光吸收值與其含量（范圍是0.1~1.0mg/ml）成正比，因此，280nm的吸光度可用作蛋白質(zhì)的定量測(cè)定。但不同種的蛋白質(zhì)對(duì)280nm波長(zhǎng)的光吸收強(qiáng)度因芳香性氨基酸殘基含量的不同而有差異，因此需用同種蛋白質(zhì)作對(duì)照，結(jié)果才可靠。在半定量測(cè)定和純蛋白的定量測(cè)定時(shí)，可用280nm的光吸收法。此外，部分純化的蛋白質(zhì)常含有核酸，核酸、核苷酸和堿基等物質(zhì)在紫外區(qū)也有強(qiáng)的光吸收，常與蛋白質(zhì)類(lèi)相互干擾。但二者的紫外吸收特性不一樣，由于核酸類(lèi)物質(zhì)在260nm有最大吸收值，因此，可利用蛋白質(zhì)280nm和260nm的吸收差法來(lái)測(cè)定計(jì)算蛋白質(zhì)濃度。紫外吸收法操作簡(jiǎn)便快捷，不消耗樣品，低濃度的鹽類(lèi)不干擾測(cè)定，在蛋白質(zhì)和酶的生化制備及其它研究中應(yīng)用廣泛，尤其是適合于柱層析分離中蛋白質(zhì)洗脫情況的檢測(cè)。 三、實(shí)驗(yàn)器材 1．標(biāo)準(zhǔn)酪蛋白：配制成濃度為1mg/ml的溶液。 2．待測(cè)蛋白質(zhì)溶液：稀釋100倍的蛋白質(zhì)溶液。 3. 紫外分光光度計(jì) 4.試管和試管架 5.移液管 四、實(shí)驗(yàn)步驟 （1）標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制: 取8支干凈試管，編號(hào)后按下表加入試劑 試 劑 管號(hào) 1 2 3 4 5 6 7 水 5.0 4.0 3.0 2.0 1.0 0.0 2.5 標(biāo)準(zhǔn)酪蛋白 0.0 1.0 2.0 3.0 4.0 5.0 0.0 血清 0.0 0.0 0.0 0.0 0.0 0.0 2.5 A280 加畢，混勻，用紫外分光光度計(jì)測(cè)A280，以蛋白質(zhì)濃度為橫坐標(biāo)，吸光度為縱坐標(biāo)作圖。 （2）樣液測(cè)定 取未知濃度的蛋白質(zhì)樣液按上述方法測(cè)定A280，對(duì)照標(biāo)準(zhǔn)曲線求得蛋白質(zhì)濃度。 五、實(shí)驗(yàn)結(jié)果 管號(hào) 1 2 3 4 5 6 7 蛋白濃度mg/ml 0.0 0.2 0.4 0.6 0.8 1.0 A280 0.000 0.174 0.350 0.519 0.687 0.853 0.449 蛋白質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)曲線 y = 0.8585xR2 = 0.9998 00.20.40.60.8 10 0.2 0.4 0.6 0.8 1 1.2 蛋白質(zhì)濃度 A280 由上圖可知，標(biāo)準(zhǔn)曲線的方程為y = 0.8585x，將y=0.449帶入方程得，x=0.523mg/ml，因?yàn)闃悠芬呀?jīng)稀釋100倍，所以樣品濃度為52.3mg/ml。 |
2樓2015-07-16 20:02:30
3樓2015-07-16 20:04:19
4樓2015-07-22 20:43:10
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