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小木蟲論壇-學術科研互動平臺 » 生物醫(yī)藥區(qū) » 生物科學 » 免疫實驗 » 免疫組化片子有污染物，求助
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免疫組化片子有污染物，求助
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本人近期做免疫組化實驗，做人的片子在顯色之后總是有污染物，內(nèi)源性過氧化物酶使用雙氧水滅活，封閉使用5%的BSA。每步都有PBS清洗，洗完之后再用清水洗一遍。在同一批實驗中只有人的有這個污染物，也不是每張人的片子都有，實在是想不通原因，來這里求助大神。 實驗步驟簡單的描述下：1，切片，烤片60℃，1-2h； 2，脫蠟及復水 二甲苯10min，100％乙醇10min，95％乙醇10min，90％乙醇10min，85％乙醇10min，80％乙醇10min， 75％乙醇10min，純水10分鐘， 3.微波修復 將切片浸入0.01M枸櫞酸緩沖液，微波中最大火力（98℃-100℃）加熱至沸騰，冷卻（約5-10min），反復兩次； 4.將切片自然冷卻至室溫，PBS洗滌3次，每次5min； 5.封閉，5％BSA，室溫20min，甩去多余液體； 6.滴加一抗，37℃，1h，或者4℃過夜； 7.PBS洗滌3次，每次3min； 8.滴加二抗，4℃，60min； 9.PBS洗滌3次，每次5min； 10.DAB顯色劑配置好后，滴加于切片，室溫，鏡下檢測反應時間（約5min）； 11.自來水沖洗干凈，過蒸餾水； 12.蘇木素復染2min，自來水沖洗； 13.脫水 70％乙醇10min，80％乙醇10min，90％乙醇10min，95％乙醇10min，100％乙醇10min，二甲苯30min； 14.樹膠封片，鏡檢。 腎 (2).jpg 污染物 (2).jpg 污染物.jpg |
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