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nishang811新蟲 (小有名氣)
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[求助]
PCR有很多非特異性擴(kuò)增，目的條帶特別淡 已有1人參與
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最近開始做PCR,模板是基因組DNA,模板GC含量百分之72，tm60度，用taq酶擴(kuò)增，一開始用60度擴(kuò)，都擴(kuò)出來(lái)但是目的條帶很淡，做了個(gè)梯度，50到60度，結(jié)果只有55度有條帶，后來(lái)用55度P了幾次，換了引物模板濃度，還是一樣。 怎么辦 |
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【答案】應(yīng)助回帖
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感謝參與，應(yīng)助指數(shù) +1
myprayer: 金幣+1, 贈(zèng)人玫瑰，手有余香，分子生物期待您更多精彩。 2015-07-18 13:03:16
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GC含量確實(shí)高了點(diǎn)。建議用takara的GC buffer試試，當(dāng)然前提是用takara的酶。 還有就是條帶雜的解決方法：把引物設(shè)計(jì)長(zhǎng)一些，提高退火溫度，有利于減少非特異性條帶 不知道你的tm值是多少，比較高的話簡(jiǎn)體在60以上做一梯度試試 實(shí)在懶得換的話，做他10份，切膠回收就可以了。。 希望對(duì)你有幫助 |
2樓2015-07-17 22:14:26
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