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如何獲得一段約127bp的DNA雙鏈片段？ 已有1人參與
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各位蟲(chóng)右：我最近構(gòu)建質(zhì)粒需要將一段約127bp的片段連入載體（載體使用兩個(gè)限制性?xún)?nèi)切酶酶切處理），現(xiàn)在比較糾結(jié)以下兩種辦法：①設(shè)計(jì)兩條互搭長(zhǎng)引物，將引物直接退火，形成雙鏈DNA片段（兩端有與載體相同的粘性末端），可以直接連入載體。但有一個(gè)問(wèn)題是長(zhǎng)引物直接互搭的效率如何？會(huì)不會(huì)得到引物二聚體的可能性更高？ ②第二種辦法是利用PCR擴(kuò)增出這條127bp的DNA片段連入T載體后，利用相同的限制性?xún)?nèi)切酶酶切后連入載體。但存在的問(wèn)題是127bp的DNA片段的回收問(wèn)題，片段太小是否不易回收？希望有經(jīng)驗(yàn)的蟲(chóng)蟲(chóng)能幫助一下！謝謝！ |
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4樓2015-07-19 23:10:53
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2樓2015-07-19 16:14:28
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5樓2018-03-10 07:11:42
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