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geyihui新蟲(chóng) (小有名氣)
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[交流]
構(gòu)建突變庫(kù)
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| 最近在構(gòu)建突變庫(kù),用電轉(zhuǎn)建庫(kù),但是效率不高,初步懷疑是連接效率不高,載體與片段摩爾比1:5,22度2小時(shí),再4 度過(guò)夜連接,請(qǐng)各位大神給點(diǎn)意見(jiàn) |
新蟲(chóng) (小有名氣)
新蟲(chóng) (初入文壇)
| 主要是兩個(gè)原因:1、感受態(tài)的轉(zhuǎn)化效率:至少要達(dá)到10的9次方,自己做能達(dá)到10的10次方甚至更高;做的時(shí)候注意菌的濃度OD在0.6-0.7之間,所用物品必須預(yù)冷,甘油最好用進(jìn)口的。2連接效率:進(jìn)口酶的連接效率沒(méi)有太大的區(qū)別,只是應(yīng)該用它的推薦條件中溫度較低的,時(shí)間較長(zhǎng)的,連接效率會(huì)更高,連接產(chǎn)物必須純化。另外轉(zhuǎn)化的電壓、電容等也會(huì)影響轉(zhuǎn)化效率, |
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