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648949632新蟲 (初入文壇)
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[求助]
蛋白質(zhì)定位關(guān)于GFP熒光分析的若干問(wèn)題。 已有1人參與
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分子生物學(xué)新手，請(qǐng)教 問(wèn)題一：蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)預(yù)測(cè)方便易入的平臺(tái)鏈接，或者軟件？ 問(wèn)題二：在煙草細(xì)胞中做亞細(xì)胞定位，不經(jīng)過(guò)原生質(zhì)體分離，要如果觀察煙草液泡定位蛋白？ 在葉背細(xì)胞和保衛(wèi)細(xì)胞中液泡的分布是怎么樣？ 問(wèn)題三：附某次實(shí)驗(yàn)的熒光及明場(chǎng)merge圖，請(qǐng)教其定位的位置。（做了質(zhì)壁分離。圖片分別為質(zhì)壁分離后和分離以前）。 跪求高手指點(diǎn) CEP2定位（質(zhì)壁分離后）.jpg CEP2定位（質(zhì)壁分離前）.jpg |
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【答案】應(yīng)助回帖
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648949632: 金幣+10, ★★★★★最佳答案 2015-11-25 09:07:14
648949632: 金幣+10, ★★★★★最佳答案 2015-11-25 09:07:14
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1 http://www.sbg.bio.ic.ac.uk/phyre2/html/page.cgi?id=index 2 不做原生質(zhì)體或質(zhì)壁分離，不容易觀察液泡，除非你耐心點(diǎn)在生長(zhǎng)旺盛的細(xì)胞處觀察類似質(zhì)壁分離的現(xiàn)象。不過(guò)依舊很難和ER上的表達(dá)區(qū)分開來(lái)。最好的辦法是同時(shí)表達(dá)一個(gè)定位標(biāo)記marker以輔助判斷。另外，觀察液泡，可能比較好的材料是根毛尖端，在擬南芥上有這么做的。 3 你展示的圖看上去很奇怪，質(zhì)壁分離前我看不到GFP信號(hào)，分離后的信號(hào)看上去也有可能是自發(fā)熒光或別的什么干擾。樓主還需要優(yōu)化顯微鏡設(shè)置。 |
3樓2015-09-08 22:16:21
2樓2015-09-07 14:47:23
4樓2015-09-09 00:10:55
648949632
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5樓2015-11-25 09:01:42
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