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cassie小萍新蟲 (小有名氣)
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[求助]
我的酶完全掛不上Ni柱了，組氨酸都在，可能是什么原因？怎么解決 已有1人參與
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| 我的酶以前是可以用Ni柱純化的，但最近完全掛不上柱了，為什么呢？構(gòu)建序列時我是在C端又加了6個his，重新測序組氨酸都在，可能是什么原因？怎么解決呢 |
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7樓2015-07-27 11:09:39
chenyuanli
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【答案】應(yīng)助回帖
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感謝參與，應(yīng)助指數(shù) +1
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完全不掛柱，是因為NI離子與帶His標(biāo)簽的目標(biāo)蛋白之間沒有結(jié)合能力，從以下幾個方面考慮一下試試看，ni柱再生一下或者更換新填料試試（可以嘗試用Cu2+柱，結(jié)合能力強于Ni2+）、帶咪唑的緩沖液是否有問題？酶表達出來后組氨酸標(biāo)簽是否還在？可以做個WB試試。 |
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cassie小萍2樓2015-07-22 21:49:13
3樓2015-07-23 14:53:18
cassie小萍
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4樓2015-07-23 15:31:32
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