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moyunzhi銅蟲 (小有名氣)
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[求助]
關(guān)于western blot的問題一大堆，求給位幫忙解答下。 已有1人參與
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做wb的問題實在是令人費解。所以將想請論壇里的隱士和大牛幫一幫小弟。實在是感激不盡啊！ 1.同時做5張膜，在同樣的條件下做，顯色時，有的膜有清晰的條帶，而有的膜整張都亮，沒有條帶。 2.膜回收后處理，用30%雙氧水處理20min(避光浸泡上上下?lián)u床)，重新孵育內(nèi)參的一抗。有的時候可以顯出弱弱的條帶，有的時候膜不亮，但發(fā)光液亮？（真是奇怪！發(fā)光液亮與盛放發(fā)光液的盒子的干凈與否有關(guān)系嗎？我覺得不會吧，難道不干凈時有HRP？）還想請問下。雙氧水對蛋白質(zhì)的作用究竟是什么？如果是氧化作用使蛋白變性的話，那抗原不也一起都變性了？那后面還怎么孵育？ 3.還是2的補充：一般公司賣的洗脫液里的成分是什么？其洗脫的原理是什么？ 4.另外一個是我沒想通的，既然二抗標(biāo)記的是HRP，可以用DAB顯色，那為什么還要那么麻煩的用ECL法呢？這兩者的在定量分析時的區(qū)別在哪里？ 就先問到這里吧，也不知道有沒有好心的大牛幫忙解答下。小弟苦等啊··· |
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4樓2015-08-01 22:01:19
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5樓2015-08-10 20:24:36
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