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jinshengfang木蟲 (正式寫手)
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[求助]
噬菌斑 已有1人參與
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請大家?guī)臀铱纯次疫@個噬菌斑平板，噬菌斑中間長了菌落，是說明這個菌是溶源菌嗎？ 這樣能說明我這個菌感染了溫和噬菌體嗎 我這個菌是BL21（DE3），我看文獻中提及這個菌是DE3溶源菌，還是這個菌圖平板就會這樣子了 IMG_20150730_075824.jpg |
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不能說明！ 首先，你平板上標(biāo)注的日期是7月5日，距你拍照已經(jīng)過去了25天，這個時間對于培養(yǎng)大腸桿菌、噬菌體來說顯得太長了點。在不知道你培養(yǎng)條件的情況下，根據(jù)我實驗室長期做噬菌體相關(guān)實驗的經(jīng)驗看，平板放置時間過長，其噬菌斑中央位置都會長出細(xì)菌，這些細(xì)菌只是暫時性的獲得了對噬菌體的抵抗能力，當(dāng)把它挑出來作進一步的實驗，你會發(fā)現(xiàn)，該菌依舊對該噬菌體敏感，這一現(xiàn)象，我們簡稱為暫時性的噬菌體抵制現(xiàn)象。 第二，僅從你這一塊平板上看，我不大明白的是，為什么會有至少三種大小不同的噬菌斑。按理來說，一種菌感染一種噬菌體的時候，其形成的噬菌斑大小應(yīng)該相對均勻。難道你用的是復(fù)雜樣品？還是噬菌體稀釋度沒控制好且倒雙層的時候沒有鋪均勻？ |
2樓2015-07-31 10:24:54
jinshengfang
木蟲 (正式寫手)
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3樓2015-07-31 12:04:45
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【答案】應(yīng)助回帖
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laozuzunzhe: 金幣+3, MicEPI+1, 鼓勵熱心應(yīng)助！ 2015-08-04 14:34:03
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嗯~ 大腸桿菌BL21（DE3）的基因型為F– ompT gal dcm lon hsdSB(rB- mB-) λ(DE3 [lacI lacUV5-T7 gene 1 ind1 sam7 nin5])，該菌株是以T7 RNA聚合酶為表達系統(tǒng)的外源基因蛋白高效表達的宿主。T7噬菌體RNA聚合酶基因的插入到λ噬菌體DE3區(qū)，其表達受該區(qū)域lacUV5啟動子調(diào)控，該區(qū)整合在BL21染色體上，BL21（DE3）適合表達非毒性蛋白。 想來你們應(yīng)該是用該菌株進行大規(guī)模的發(fā)酵生產(chǎn)。通過你說的，個人判斷應(yīng)該是：1、發(fā)酵液受到了噬菌體的污染（你的點板實驗可以驗證培養(yǎng)液中是否含有該菌株的噬菌體）2、該噬菌體污染應(yīng)該是來自外界的烈性噬菌體（也許是來自空氣中噬菌體的污染，也可能是培養(yǎng)基滅菌不徹底使之含有噬菌體），BL21(DE3）基因組中雖然含有λ噬菌體基因，但其基本不會裂解形成噬菌斑的。3、涂布平板上形成的噬菌斑中央出現(xiàn)了菌落，不能說明形成該菌落的菌是溶原性的，原因第一條回復(fù)我已經(jīng)說了。 希望能對你有所幫助~ 祝實驗順利~ |
4樓2015-08-01 10:18:44
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