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witty319銀蟲 (小有名氣)
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[求助]
凍存的肝組織，提蛋白加裂解液之前，放在冰上5分鐘，會不會使磷酸化蛋白去磷酸化？
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如題，提取小鼠肝臟組織的總蛋白，目的是做磷酸化蛋白的western blot. 從-80度冰箱取出樣品后放在液氮中，將樣品取出約50 mg于預(yù)冷的離心管中后，再扔入液氮中。 去配RIPA裂解液的時候，師弟將液氮中的樣品全部取出插在了冰上，我回來的時候，感覺樣品中的液氮已經(jīng)揮發(fā)光了，趕緊加入了蛋白裂解液（里面有蛋白酶抑制劑和磷酸酶抑制劑），這個過程大約有五六分鐘。 加裂解前，樣品在冰上的這段時間，會使肝組織中的磷酸化蛋白去磷酸化嗎？ 希望有經(jīng)驗的前輩多多指導(dǎo)，感謝！ |
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