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碧雪凡銅蟲 (初入文壇)
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[交流]
分光光度計(jì)A260/A280 A260/A230 比值所代表意義
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雖然這篇文章有些小問題第二點(diǎn)說純DNA的A260/A280比值為1.8，純RNA為2.0，但在第五點(diǎn)又說是2.0與2.5？但是其他地方的分析還是能夠帶來一些幫助的。 其實(shí)網(wǎng)上也很多A260/A280的區(qū)間，1.6-2.0；1.6-1.8；1.7-1.9；1.8-2.0但他們都沒有明確溶液的狀態(tài)，是TE還是水？pH值多少？0.1個(gè)pH值的改變能夠引起A260/A280較大幅度的改變。在qiagen的DNA實(shí)驗(yàn)方案及應(yīng)用里有兩處提到DNA純度問題，第一個(gè)是3/16：在10mM Tris-Cl、pH8.5條件下，純凈的DNA的A260/A280比率為1.8~2.0之間。第二處是10/16：在10mM Tris-Cl、pH7.5條件下，純凈的DNA的A260/A280比率為1.7~1.9之間。但是qiagen里沒有具體提到A260/A230的情況。不過在invitrogen的PureLink（TM）Genomic DNA Kits中有提到他們的標(biāo)準(zhǔn)是：A260/A280比率為1.7~1.9同時(shí)A260/A230在2.0~2.5但是血液樣本偏低些是1.8以上。 但平時(shí)我們做實(shí)驗(yàn)也會(huì)發(fā)現(xiàn)其實(shí)在A260/A280值稍好的情況下，A260/A230不在這個(gè)區(qū)間對(duì)PCR似乎也未有大的影響。PCR體系本身就有一定的抗污染能力，而且一般上樣量少，所以影響有限。如果是乙肝這類上樣量至少20ul或者占體系一半的，可能就會(huì)有相對(duì)明顯的效果。 最后吐槽一個(gè)，無論是Tiangen還是qiagen或其他的TE，在我這的紫外分光光度計(jì)測(cè)OD230均很高。qiagen的說明書還會(huì)明確說使用前1比3稀釋后測(cè)OD，但是Tiagen完全不提，在不稀釋的情況下基本都是一堆++++，Tiangen的還說他們的TE就是在這款機(jī)器上不行，這。。。。。。不知道各位是否也有這情況，還是真如他們所說。。。。。 |
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2015-08-18 09:30:30, 390.76 K
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