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碧雪凡銅蟲 (初入文壇)
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[交流]
培養(yǎng)細(xì)胞/小鼠肌肉組織樣本提取gDNA
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培養(yǎng)細(xì)胞/小鼠肌肉組織樣本提取 DNA提取純化試劑優(yōu)化-1/2/3 培養(yǎng)細(xì)胞：1和2； 小鼠肌肉組織：3和4 a-1/2/3/4 試劑1 b-1/2/3/4 試劑2 c-1/2/3/4 試劑3 950ul細(xì)胞懸液8000g，3min離心，棄上清，加入180ul消化液； 加入20ul 蛋白酶K（20mg/ml），再加入10ul RNase (10mg/ml)渦旋5s，室溫放置3min； 加入200ul 結(jié)合液，渦旋10s，58℃放置10min； 加入200ul無水乙醇，渦旋10s混勻，轉(zhuǎn)入吸附柱，8000g離心1min，棄濾液； 加入500ul WBⅠ溶液，8000g離心1min，棄濾液； 加入500ul WBⅡ溶液，12000g離心3min，棄濾液； 加入100 ul TE溶液，洗脫5min放12000g離心1min，重新過柱洗脫。 取約21mg小鼠肌肉組織剪碎 加入180ul消化液； 加入20ul 蛋白酶K（20mg/ml），58℃放置10min； 再加入10ul RNase (10mg/ml)渦旋5s，室溫放置3min； 加入200ul 結(jié)合液l，加入200ul無水乙醇，渦旋10s混勻，轉(zhuǎn)入吸附柱，8000g離心1min，棄濾液； 加入500ul WBⅠ溶液，8000g離心1min，棄濾液； 加入500ul WBⅡ溶液，12000g離心3min，棄濾液； 加入100 ul TE溶液，洗脫5min放12000g離心1min，重新過柱洗脫。 OD值檢測結(jié)果 樣品 ng/ul 230 260 280 320 260/280 260/230 洗脫效率 100ul TE室溫第1次洗脫 5min a1 32 0.302 0.684 0.390 0.048 1.86 2.50 91.43% a2 60 0.571 1.275 0.724 0.071 1.84 2.41 95.24% b1 73 0.632 1.495 0.833 0.036 1.83 2.45 94.81% b2 78 0.648 1.592 0.868 0.024 1.86 2.51 93.98% c1 64 0.614 1.356 0.760 0.075 1.87 2.38 88.89% c2 64 0.630 1.361 0.773 0.082 1.85 2.33 86.49% 100ul TE室溫第2次洗脫 3min a1 35 0.410 0.780 0.463 0.085 1.84 2.14 a2 63 0.636 1.347 0.776 0.081 1.82 2.28 b1 77 0.821 1.656 0.958 0.118 1.83 2.19 b2 83 0.922 1.810 1.057 0.155 1.83 2.16 c1 72 0.924 1.643 0.980 0.195 1.84 1.99 c2 74 0.969 1.710 1.014 0.231 1.89 2.00 100ul TE室溫第1次洗脫 5min a3 27 0.311 0.595 0.349 0.053 1.83 2.10 72.97% a4 31 0.303 0.677 0.391 0.050 1.84 2.48 77.50% b3 53 0.576 1.146 0.658 0.082 1.85 2.15 79.10% b3 55 0.539 1.153 0.653 0.062 1.85 2.29 78.57% c3 18 0.201 0.394 0.229 0.037 1.86 2.18 81.82% c4 58 0.506 1.194 0.657 0.034 1.86 2.46 86.57% 100ul TE室溫第2次洗脫 3min a3 37 0.506 0.826 0.490 0.084 1.83 1.76 a4 40 0.47 0.89 0.523 0.086 1.84 2.08 b3 67 0.87 1.50 0.901 0.152 1.80 1.88 b3 70 0.88 1.56 0.922 0.154 1.83 1.93 c3 22 0.25 0.49 0.279 0.038 1.86 2.11 c4 67 0.71 1.42 0.811 0.087 1.85 2.13 細(xì)胞樣本提取gDNA拖帶，細(xì)胞狀態(tài)不好，小鼠肌肉組織樣本主帶清晰明顯，無拖帶情況。 以兩次洗脫次數(shù)為例，第一次洗脫效率在70-90%，兩種樣本提取到的gDNA的A260/A280與A260/A230均在1.7~1.9與1.8~2.5區(qū)間。 從gDNA得率來看：優(yōu)化2效果最佳，優(yōu)化3次之，優(yōu)化1最差。 Marker為DL15000 01.png |
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