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生物太憂桑銀蟲 (初入文壇)
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[求助]
熒光定量PCR分析 已有1人參與
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問題很基礎(chǔ) 我是跟著師兄做實(shí)驗(yàn)的�，F(xiàn)在QPCR結(jié)果出來了。整理了目的基因CT值，內(nèi)參CT值�，F(xiàn)在要計算△CT，△△CT，還有2^-△△CT。他也不講這些參數(shù)是做什么用的。要我自己明白。我手里有一本QPCR儀器的書。上面原理我基本看了。ct，溶解曲線可以看懂，但不明白為什么要算后面的值，也不知如何用 請問要怎樣快速理解上面內(nèi)容？ 然后我們要檢測目的基因在不同條件下的表達(dá)量，需要用什么統(tǒng)計方法呢，哪個軟件可實(shí)現(xiàn)？我學(xué)過統(tǒng)計學(xué)。 最后想問下，同一個目的基因的溶解曲線都是單峰，但不同樣品的溶解溫度不同，可能什么原因造成？ 多謝大神指點(diǎn) |
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2樓2015-08-20 23:16:59
【答案】應(yīng)助回帖
★ ★ ★
西門吹雪170: 金幣+3, 鼓勵回帖交流 2015-08-20 23:32:03
西門吹雪170: 金幣+3, 鼓勵回帖交流 2015-08-20 23:32:03
第二個問題，溶解曲線是衡量引物質(zhì)量的一個重要指標(biāo)，如果呈現(xiàn)單峰，說明擴(kuò)增特異性較高，LZ可以通過標(biāo)準(zhǔn)曲線進(jìn)一步驗(yàn)證擴(kuò)增效率，通常需要位于90%-110%范圍內(nèi)，同時R2>95%. 至于不同樣品的溶解溫度有差異，LZ是指溶解曲線單峰的位置不一樣？這可能與每個樣品濃度以及純度不一樣造成的，這可能是RNA提取后沒有對濃度均一化，或者反轉(zhuǎn)錄操作不當(dāng)引起的，不過只要引物擴(kuò)增效率好且是單峰，這個并不存在影響。 |
3樓2015-08-20 23:22:51
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