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原核表達純化蛋白問題
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載體pet28a,誘導(dǎo)后蛋白上清表達量少，大部分已包涵體形式，用鎳柱純化后復(fù)性出現(xiàn)大量沉淀，復(fù)性率太低，考慮上清純化，但是上清含量少不能純化出純度高的蛋白，怎么辦，條帶分別是MARK、過柱液、洗滌液、洗滌液、洗脫液、洗脫液、洗脫液、洗脫液、倒數(shù)第二是25度誘導(dǎo)上清、25度沉淀，目的蛋白大小是自后面那個最亮的 }TI6_1Z[$5(}7J4@H{3B0UT.png |
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2樓2015-08-29 13:08:52
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【答案】應(yīng)助回帖
| 原核蛋白表達純化本來產(chǎn)生的大多數(shù)蛋白就是包涵體，上清蛋白表達技術(shù)主要就是利用條件矩陣的方法反復(fù)測試，耗時長才會有效。做過基因優(yōu)化么？或者可以更換表達載體和表達系統(tǒng)——畢竟有些蛋白就是很難表達。。。 |
3樓2015-08-31 13:27:52
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4樓2015-09-20 20:47:38
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5樓2015-09-23 20:16:30
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6樓2015-10-21 21:06:33
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