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基因組DNA為模板進(jìn)行PCR，第一次擴(kuò)出來了，后面怎么重復(fù)都不行。 已有12人參與
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提取秀麗線蟲基因組DNA，以此為模板進(jìn)行PCR擴(kuò)增，目的片段2300bp。使用Q5 高保真DNA聚合酶，25ul體系（7.25ul H2O＋5ul 5×buffer＋2ul 2.5mM dNTP＋1.25ul上游引物＋1.25ul下游引物＋3ul 模板＋5ul GC Enhancer＋0.25ul Q5酶）。第一次擴(kuò)增成功，但是之后模板用沒了又重新提了3次基因組DNA，始終不能擴(kuò)增出目的片段，退火溫度從50度到72度都試過了，不行，Taq酶也試過了，不行。 第一次擴(kuò)增成功（最上面那條帶） .jpg 最初使用的條件.png 后來的結(jié)果就一直是這樣的.png |
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19樓2015-09-02 13:44:41
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8樓2015-08-28 17:20:22
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10樓2015-08-31 12:18:25
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王棟13樓2015-09-01 13:59:18
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【答案】應(yīng)助回帖
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基因組DNA不確定性太多，巢擴(kuò)可以改善這個(gè)情況。重新設(shè)計(jì)一對(duì)巢擴(kuò)引物，再以巢擴(kuò)出來的目的片段為模板，就可以了。我自己這么p過3000多的片段 發(fā)自小木蟲Android客戶端 |
29樓2015-09-04 12:03:25
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9樓2015-08-31 11:15:45
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