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小樣本線粒體(斑馬魚胚胎)基因組怎樣提?提取量可以PCR用于鑒定就可以
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希望提取mitochondrial-dna,直接PCR后用于跑膠鑒定,所以提取出的MITO-DNA可以PCR就可以。 已經(jīng)嘗試用普通提取基因組的方法: NAOH溶液,95°加熱溶解,之后加入Tris.Hcl,直接取一點PCR,但是跑膠沒有條帶。 分析原因: 1.線粒體基因組不夠,因為每組我只有5胚胎,是否可以通過增加模板量解決? 2. Run PCR program 不對,我用的是普通PCR的program。 3. 本方法沒法提取出線粒體DNA。 4. 引物問題,目的長度200bp,primer為20pb,是否設計鑒別mito的primer也和普通的不同呢? 請問大家都是怎么提取線粒體基因組的?針對我的實驗目的,請教各位有什么好的protocol或者試劑or kit可以用,因為鑒定組別多,要求就是越省時越好。 |
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