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Snow_amy新蟲 (初入文壇)
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[求助]
關(guān)于WB條件改進(jìn)的問(wèn)題 已有1人參與
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我用的材料是細(xì)菌，抗體是讓公司免疫兔子得到的，這個(gè)抗體用純化的蛋白去做是可以工作的，但是我用我的菌去做得不到目的條帶，而且有很多雜帶，如果用這個(gè)基因過(guò)表達(dá)的菌去做就可以得到想要的條帶，一抗我是用的1:1000的稀釋比例，如果我把一抗?jié)舛扔玫?:500，只能是雜帶更多更亮，在野生型中依舊沒(méi)有目的條帶。應(yīng)該是在野生型中量比較低，求助各位大俠，看看能怎么改變一下！多謝多謝！ 從左往右依次的野生型菌，目的基因敲除的菌株，目的基因過(guò)表達(dá)的菌株，和GST標(biāo)記的目的基因。 結(jié)果 |
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acvhreinlg
銀蟲 (正式寫手)
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【答案】應(yīng)助回帖
★ ★ ★ ★ ★
感謝參與，應(yīng)助指數(shù) +1
Snow_amy: 金幣+5, ★有幫助 2015-08-31 15:07:38
感謝參與，應(yīng)助指數(shù) +1
Snow_amy: 金幣+5, ★有幫助 2015-08-31 15:07:38
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雖然我不是做微生物的，談點(diǎn)看法，單個(gè)細(xì)菌的蛋白表達(dá)量低很正常，過(guò)表達(dá)某一蛋白常常會(huì)抑制其他的蛋白，我覺(jué)得可能蛋白樣品處理上要想想辦法，用抗體加beeds抓取目的蛋白等辦法，還要要看看這個(gè)蛋白原先是胞內(nèi)的還是膜蛋白還是分泌蛋白。western結(jié)果有問(wèn)題我認(rèn)為常常是樣品的問(wèn)題。 發(fā)自小木蟲Android客戶端 |
2樓2015-08-30 13:23:00
Snow_amy
新蟲 (初入文壇)
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3樓2015-08-31 15:07:41
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