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啟從QICONG新蟲 (初入文壇)
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[求助]
為什么用提藻的DNA做18sRNA的PCR就是做不出來 已有1人參與
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我提了三角褐指藻的總DNA，跑電泳，跑出來了，而且比marker還亮，但是我把總DNA稀釋2、4、6、8倍做18sPCR，跑不出條帶，后來查了一下資料，說做PCR的模板有1ng的DNA就夠了。所以后來我又跑膠，估計(jì)了一下DNA的濃度，濃度應(yīng)該是大于100ng/5ul的，就把提出來的DNA稀釋了50倍、100倍、150倍、200倍再做18sRNA的PCR，但是后來跑膠還是沒有跑出來，我想問問各位大神，這到底是怎么了？哪里出問題了？我接下來該怎么辦？ |
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【答案】應(yīng)助回帖
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感謝參與，應(yīng)助指數(shù) +1
啟從QICONG: 金幣+4, ★★★很有幫助, 太贊啦，謝謝啦 2015-09-02 11:53:47
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不一定是1ng，看你是什么模板，不同來源的模板和上樣量的要求，看資料里邊有（http://www.detaibio.com/topics/pcr-faq-specific-amplify.html） 模板濃度，引物濃度，酶濃度這些東西按照酶的說明書操作都能擴(kuò)增出來，跑不出來，稍微優(yōu)化一下體系也差不多能有個(gè)結(jié)果，你不要只糾結(jié)于模板濃度，畢竟是分子實(shí)驗(yàn)多方面考慮啊，引物特異性驗(yàn)證，擴(kuò)增酶要高特異性熱啟動(dòng)聚合酶擴(kuò)增，摸索溫度條件等，祝成功 |
2樓2015-09-01 10:16:05
啟從QICONG
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3樓2015-09-03 13:12:45
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4樓2015-09-06 09:50:51
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