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red同源重組做敲除時 電入片段后pcr無條帶？？
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如題，在大腸JM109中用red同源重組做敲除時，電入擴(kuò)增好的片段，然后PCR驗證是否敲除成功。照理說無論是否敲除成功，都該有條帶的（若成功，該是1500bp;不成功，該是基因大�。�。可我的PCR結(jié)果是陽性對照（肯定含該基因的菌）都有基因大小的條帶，做了電擊的都沒有條帶。。。然后我提基因組驗證，有的敲除成功，可是抗性一直消不掉。 有以下問題：我的pcr是用95度10min預(yù)變性，95度30s變性。而且陽性對照都出了很好的條帶，為甚么做了電擊的菌做菌落pcr就沒東西出來？而提了基因組又能有條帶的？為啥后面消抗老不長？？ |
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25樓2015-12-15 17:14:43
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211001123樓
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yudit24樓
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