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propamidine
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[求助]
如何對(duì)絲狀真菌（如灰葡萄孢）細(xì)胞器進(jìn)行GFP、RFP雙標(biāo)記？？~~~~~~~~~~~ 已有1人參與
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如題：如何對(duì)絲狀真菌（如灰葡萄孢）細(xì)胞器進(jìn)行GFP、RFP雙標(biāo)記？ 本人對(duì)分子生物學(xué)、基因工程是門外漢。  因課題需要，現(xiàn)欲對(duì)絲狀真菌（如灰葡萄孢）進(jìn)行GFP、RFP雙標(biāo)記，分別標(biāo)記細(xì)胞核、線粒體。 最終目的是在激光共聚焦顯微鏡下直接觀察細(xì)胞核、線粒體的亞細(xì)胞定位。 不知道如何進(jìn)行....包括： 1、基本流程是什么？ 2、序列如何選擇？ 3、載體如何選擇和構(gòu)建？ 4、用酵母還是農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化？如何轉(zhuǎn)化？ 等等問(wèn)題....因?yàn)椴欢�，都不知道該�?wèn)些什么  希望蟲友能幫助，指點(diǎn)迷津。  提前感謝蟲友的幫助��！謝謝�。。�！ |
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4樓2016-11-14 10:48:54
Neo2000
木蟲 (著名寫手)
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【答案】應(yīng)助回帖
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propamidine: 金幣+20, ★★★很有幫助, 你好，具體的protocol（傻瓜式的。。。）或者文獻(xiàn)能推薦嗎？我也找不到類似的中文論文或文獻(xiàn)。 2015-08-31 22:30:38
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propamidine: 金幣+20, ★★★很有幫助, 你好，具體的protocol（傻瓜式的。。。）或者文獻(xiàn)能推薦嗎？我也找不到類似的中文論文或文獻(xiàn)。 2015-08-31 22:30:38
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首先，你需要合適的載體系統(tǒng)，真菌必須對(duì)篩選標(biāo)記敏感，你想進(jìn)行雙標(biāo)記，可以考慮同時(shí)轉(zhuǎn)化兩個(gè)載體進(jìn)去或者分兩次轉(zhuǎn)，絲狀真菌的轉(zhuǎn)化可以考慮走原生質(zhì)體途徑或者借助農(nóng)桿菌 [ 發(fā)自小木蟲客戶端 ] |
2樓2015-08-31 18:47:11
qilinhuang
新蟲 (初入文壇)
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3樓2016-09-06 10:11:27
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