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小小技術(shù)官木蟲 (正式寫手)
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[求助]
Filipin Staining 非律平細(xì)胞染色 UV 激發(fā) 看不到
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各位蟲友，大家好。實驗遇到問題，求助大家，如果誰做過這個非律平細(xì)胞染色，麻煩指導(dǎo)一下，不勝感激！ 最近在做一個膽固醇相關(guān)的課題，查閱文獻得知 Filipin（一種抗真菌抗菌素） 菲律賓菌素可以特異性 結(jié)合游離的膽固醇， 然后再紫外激發(fā)下呈現(xiàn)特異熒光。 我操作的具體步驟： 1. 爬片 2.PBS ×3, 5min 3.4% 多聚甲醛固定 15min 4.PBS ×3, 5min 5.染色 2h (Filipin Complex: Sigma (F-9765) Stock: 50 mg/ml in DMSO final concentration 0.05 mg/ml in PBS Protect filipin solutions from light ) 備注：12孔板，用了500ul工作液（不知道是否太少了點，一般免疫熒光孵抗體的話是夠用了） 6.PBS ×3, 5min 7.普通免疫熒光顯微鏡 紫外激發(fā) 有些非特異點 確定不是細(xì)胞內(nèi)的 ps. 網(wǎng)上的步驟中，指出多聚甲醛固定后 需要用甘氨酸（CHIP實驗是需要這一步來終止多聚甲醛的）或者氯化銨終止 多聚甲醛，這一步真的需要嗎？ |
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小小技術(shù)官
木蟲 (正式寫手)
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3樓2019-12-10 14:47:22
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