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一旺百旺新蟲 (著名寫手)
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[交流]
關(guān)于脂質(zhì)體制備的過程中遇到的幾個問題，交流一下大家的解決方法 已有10人參與
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背景介紹：方法是薄膜法，欲包裹藥物鹽酸布比卡因，輔料是蛋黃卵磷脂和膽固醇。實驗設(shè)備是旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀，搖床，冷凍干燥設(shè)備。 實驗過程是蛋黃卵磷脂200mg和膽固醇94g溶于20ml氯仿，加入250ml的圓底燒瓶中，旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)1-3個小時，(旋轉(zhuǎn)速度50r/min,37攝氏度，真空度0.1MPa),冷凍干燥機抽真空（真空度0.1MPa，30度），之后用20ml-30ml的pH=7.4的磷酸緩沖液溶解200mg的布比卡因后加入圓底燒杯中，放置于搖床上37攝氏度，150r/min過夜，0.8um的濾頭過濾，很難過濾。用了半上午終于過濾了一些，之后測粒徑和掃描電鏡。 問題：1.實驗其實目標(biāo)的粒徑在10-30um，但是薄膜法要獲取這個粒徑還是有一定難度的，大多是通過復(fù)乳法獲得這個粒徑范圍的，如果用薄膜法，加入二棕櫚酰磷脂酰甘油DPPG和三辛酸甘油酯TO是否能夠獲得這個粒徑范圍的脂質(zhì)體，或者用這些輔料通過薄膜法怎么樣才有可能獲得這個粒徑范圍的脂質(zhì)體。 2.稱量蛋黃卵磷脂的時候遇到一個非常棘手的問題就是如何準(zhǔn)確稱量幾十毫克或者幾百毫克的蛋黃卵磷脂，因為藥品比較貴中，買的量不多，而蛋黃卵磷脂容易黏在藥匙上，藥匙上會浪費很多，最后解決的方法是直接稱量到燒杯中，藥匙用超小的藥匙，有的人提建議是用減重法，將整包藥都稱量一下，然后取出來一部分后，藥匙上的用后續(xù)的溶液沖洗來，感覺操作起來還是挺有難度的，另一種方法是直接將買來的1g蛋黃卵磷脂都配成濃溶液，但是感覺溶液的穩(wěn)定性很難保證，不知道還有別的好辦法去準(zhǔn)確稱量？另外不知道二芥酰卵磷脂DEPC和二棕櫚酰磷脂酰甘油DPPG是否和蛋黃卵磷脂一樣很粘稠，稱量的時候也會遇到這種情況？ 3.實驗方案中加入的蛋黃卵磷脂和膽固醇是否是太多了？有人指出蛋黃卵磷脂的濃度應(yīng)在1-5mg/ml，這個濃度是否靠譜，這個濃度的溶劑是氯仿還是后面的緩沖液？用的圓底燒瓶是否有點大？蛋黃卵磷脂和膽固醇的比例一般多少合適呢？看資料上大多是摩爾比2：1 4.鹽酸布比卡因藥典上寫的是溶于水的，為啥加入磷酸緩沖液溶解的時候感覺很多都沒有溶解呢，超聲了一下，效果不是很好。 5.做完以后發(fā)現(xiàn)成膜有點不均勻，不是人家均勻透明的膜，我感覺可能是我的輔料配比有問題，我的配比是否真有很大問題？ 6.測粒徑的時候用的是馬爾文2000來測，測的時候是稀釋于生理鹽水中測的，測試過程中，需要知道樣品的折光率，但是這個折光率大概應(yīng)該是在什么范圍呢？不同的折光率測出來的結(jié)果差別還是挺大的，最后得出來這么多的結(jié)果怎么看哪個更可用呢？看擬合曲線后的偏差？還是什么？如果看偏差的話偏差小于多少可以認為是可信的呢？ 7.測掃描電鏡，樣品應(yīng)該怎么處理呢？我們的掃描電鏡能測的只能是粉末，本來考慮用抽真空把液體抽干，放在培養(yǎng)皿上試了試，結(jié)果很快的出現(xiàn)了白色粉了，但是又過了半個小時以上吧，又成透明的膜的狀態(tài)了，用東西刮下來，有點黏糊，沒有辦法測電鏡。我在想這個過程很詭異，怎么解釋呢，這樣處理樣品是否存在問題，脂質(zhì)體應(yīng)該都破了吧，想著再試試冷凍干燥，但是覺得還是存在問題的，脂質(zhì)體能禁得起這樣折騰？膜結(jié)構(gòu)被破壞了吧。如果要冷凍干燥的話應(yīng)該怎么進行呢？ |
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