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xiaomili1206新蟲 (初入文壇)
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[交流]
細(xì)胞轉(zhuǎn)染的質(zhì)粒你提對了嗎 已有3人參與
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| 聽說細(xì)胞轉(zhuǎn)染的質(zhì)粒提取要求無內(nèi)毒素、蛋白污染，是所有的轉(zhuǎn)染都是這個要求嗎？靠譜嗎？大家給點(diǎn)意見吧 |
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小木蟲: 金幣+0.5, 給個紅包，謝謝回帖
小木蟲: 金幣+0.5, 給個紅包，謝謝回帖
| 細(xì)胞轉(zhuǎn)染瞬時轉(zhuǎn)染當(dāng)然不能用內(nèi)毒素和蛋白污染了，真核蛋白表達(dá)不同于原核蛋白表達(dá)，質(zhì)粒要求嚴(yán)格，有時原核也得要去內(nèi)毒素啊，蛋白污染就不用說了，當(dāng)然不能有污染 |
7樓2015-09-10 14:51:05
2樓2015-09-08 10:13:48
3樓2015-09-08 10:34:23
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做轉(zhuǎn)染實(shí)驗(yàn)，質(zhì)粒的純度是一定要的。OD值260/280在1.8左右，是一個基本的指標(biāo)，即沒有蛋白和RNA 污染。最重要的是內(nèi)毒素要清除干凈。內(nèi)毒素清除的效果，才是是否用于轉(zhuǎn)染的決定指標(biāo)。 內(nèi)毒素是革蘭氏陰性細(xì)菌細(xì)胞壁中的一種成分，很穩(wěn)定，需要很長時間高溫或強(qiáng)化試劑才能清除干凈，對宿主是有毒性的。目前用的質(zhì)粒大部分是從大腸桿菌中提取出來的。在提取質(zhì)粒的過程中如果不經(jīng)過特殊步驟處理是很難將內(nèi)毒素取出干凈的。殘存內(nèi)毒素的質(zhì)粒倍轉(zhuǎn)染進(jìn)細(xì)胞后就會對細(xì)胞造成傷害，即使質(zhì)粒濃度再高也達(dá)不到理想的轉(zhuǎn)染效果。 英格恩 轉(zhuǎn)染試劑 ECL發(fā)光液 RNA DAN 轉(zhuǎn)染試劑 |
4樓2015-09-08 11:04:50
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