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zc980735353鐵蟲 (初入文壇)
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[求助]
抗菌實(shí)驗(yàn)96孔板測(cè)MIC問題 已有1人參與
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| 大家好，最近我做了4種菌（MRSA 大腸 金葡 沙門），96孔板培養(yǎng)了18小時(shí)左右，測(cè)OD時(shí)所有的孔數(shù)據(jù)都是一樣的，都沒有長菌（包括空白菌液對(duì)照），（菌液稀釋了10的5次方，LB培養(yǎng)基，）不知道是哪里出了問題？還望指導(dǎo)，（最好有詳細(xì)的步驟）謝謝 |
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2樓2015-09-09 09:51:23
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將金黃色葡萄球菌、大腸桿菌、銅綠色假單胞菌、枯草芽孢桿菌在滅菌LB培養(yǎng)基平板上過夜培養(yǎng)，挑取單菌落接種于滅菌錐形瓶的LB培養(yǎng)液，37℃170 r/min過夜培養(yǎng)。將培養(yǎng)后的菌液作1:1000稀釋(使菌數(shù)達(dá)到105~106cfu/ml )。分別將有抑菌活性的待測(cè)擬擬肽溶液按2倍連續(xù)稀釋后加入96孔微量培養(yǎng)板中，除第1孔加入稀釋菌液90μl外，2-10各孔均加入50μl，繼于第1孔加入抗菌擬肽原液(濃度1024 μg/ml ) 10μl，混合后吸出50μl加入第2孔中，依次稀釋至第9孔，棄去50μL。 第10孔生長對(duì)照，第11孔LB培養(yǎng)液50μl空白對(duì)照，第12孔為陽性對(duì)照(慶大霉素)加90μl菌液和10μl同濃度抗生素溶液混合后棄50μl。37 ℃培養(yǎng)18h后，用ELISA酶標(biāo)儀分別在490/520/600/620nm下對(duì)平板進(jìn)行掃描 我是按照這個(gè)步驟做的，測(cè)OD值所有數(shù)據(jù)都是一樣的，就是沒長菌，不知道是什么問題。 |
3樓2015-09-09 15:57:14
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4樓2015-09-09 17:27:30
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5樓2015-09-10 09:11:39
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6樓2015-09-10 09:28:00
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