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酸奶一號(hào)銀蟲(chóng) (小有名氣)
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[求助]
絲狀真菌菌絲細(xì)胞中ROS檢測(cè)
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各位蟲(chóng)友，大家好，小蟲(chóng)目前在做有關(guān)A.flavus菌絲中ROS檢測(cè)，簡(jiǎn)述如下： 實(shí)驗(yàn)分組為control對(duì)照組（只加細(xì)胞）、損傷組（加細(xì)胞，然后用雙氧水損傷）、實(shí)驗(yàn)組（加細(xì)胞，后加藥品處理）。實(shí)驗(yàn)結(jié)束時(shí)吸取菌絲球經(jīng)PBS洗滌后，加入濃度為10uM的DCFH-DA熒光探針溶液中，在37℃細(xì)胞培養(yǎng)箱內(nèi)孵育30分鐘，后用滅菌PBS洗滌三次，以充分去除未進(jìn)入細(xì)胞內(nèi)的DCFH-DA。最后用熒光顯微鏡觀察細(xì)胞熒光強(qiáng)度。 本人購(gòu)買的是sigma公司的DCFH-DA熒光探針?lè)勰?′,7′-Dichlorofluorescin diacetate），DMSO配成10mM儲(chǔ)備液，-20℃保存，實(shí)驗(yàn)時(shí)稀釋1000倍至濃度為10uM使用。DCFH-DA(2',7'-二氯熒光黃雙乙酸鹽)是非標(biāo)記性的氧化敏感的熒光探針，DCFH-DA本身沒(méi)有熒光，可以自由穿過(guò)細(xì)胞膜，進(jìn)入細(xì)胞后，可以被細(xì)胞內(nèi)的酯酶水解生成DCFH。而DCFH不能通透細(xì)胞膜，從而使探針很容易被裝載到細(xì)胞內(nèi)。細(xì)胞內(nèi)的活性氧可以氧化無(wú)熒光的DCFH生成有熒光的DCF。檢測(cè)DCF的熒光以判定細(xì)胞內(nèi)活性氧的水平。 哪位小伙伴有做過(guò)或正在做相關(guān)試驗(yàn)，可以相互聯(lián)系交流一下��！ 圖片1.jpg |
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5樓2017-02-27 23:43:07
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