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[求助]
用WB能同時檢測多種蛋白質(zhì)，可行嗎？ 已有5人參與
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各位大俠，沒做過細胞實驗的菜鳥我要開始做實驗了，可是，還沒試驗就鉆胡同了 求各路大俠指點一二，感激不盡：我需要在養(yǎng)細胞后測定細胞內(nèi)四種蛋白質(zhì)的含量，可以用western blot嗎？如果用WB，是用傳說中的跑出不同蛋白質(zhì) 后再將膠剪開，分別加抗體，這種方法嗎？還是說有其他方法？ 謝謝大俠們 菜鳥 |
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2樓2015-09-17 17:14:49
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4樓2015-09-18 11:33:21
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當(dāng)然可以鑒別多種蛋白，屬于半定量分析方法。跑膠后轉(zhuǎn)膜，然后加一抗二抗檢測第一種蛋白，曝光過后，洗幾遍加另一種一抗和二抗，以此類推就可以 發(fā)自小木蟲IOS客戶端 |
5樓2015-09-18 12:04:41
soarshining
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如果是分子量不同能分開那就剪開，我們都是這么做的。你只要在膜上用鉛筆或者別的做好標(biāo)記，哪個條帶是什么就行。marker作用本就只是分辨哪一個條帶是啥。如果不能，那就只能跑幾塊膠，不推薦重新用，這沒必要省，除非你樣品太珍貴 發(fā)自小木蟲Android客戶端 |
6樓2015-09-18 12:14:35
18761615793
木蟲 (正式寫手)
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【答案】應(yīng)助回帖
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Autum: 金幣+5, ★★★很有幫助 2016-01-10 17:07:47
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Autum: 金幣+5, ★★★很有幫助 2016-01-10 17:07:47
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果真是菜鳥，哈哈，沒事的 當(dāng)然可以同時檢測多種蛋白，不過是這樣的，你要檢測的蛋白是帶同樣的標(biāo)簽嗎？因為WB就是根據(jù)蛋白帶的標(biāo)簽才能和他結(jié)合，從而檢測出蛋白（這點主要是WB的原理），如果你的四中是帶同樣的標(biāo)簽，就不需要剪開了，實驗做到最后依然是一張完整的膜，如果不是帶一樣的標(biāo)簽，那就要剪膜，所以說在SDS PAGE上樣的的時候就要注意了，帶相同標(biāo)簽的點樣要在一起，這樣在抗體孵育的時候好剪膜，我們一般一抗二抗都是一起加孵育很正常，瞬時轉(zhuǎn)染后的細胞產(chǎn)物還是比較好檢測的~比一般的原核蛋白處理簡單一點~好運 |
7樓2015-09-18 14:44:48
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