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漠筱禾金蟲 (初入文壇)
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[求助]
殼斗科錐屬植物DNA提取，一開始提出來的有降解，之后不管用什么方法都提不出來 已有3人參與
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| 如題，用硅膠保存的葉片，之前用QIAGEN的試劑盒提出來過，現(xiàn)在用同樣的試劑盒就提不出來了，糖的含量很高，過白色的柱子都離不下去，用CTAB-free冰浴十分鐘抽提1-2次后，可以去掉大部分的糖，之后再按照QIAGEN的步驟提，很容易過柱子，但是跑膠什么都沒有，測(cè)濃度顯示10-20ng/ul，純度也還好。用CTAB也試過，步驟如下：1mlCTAB-free（用的時(shí)候加了10ul巰基乙醇）冰浴十分鐘，9000rad/min離心5min，去上清，加入1mlCTAB（用的時(shí)候加了10ul巰基乙醇），65度水浴45min，離心，酚氯仿異戊醇（25：24：1）抽提，離心取上清，氯仿異戊醇（24:1）抽提，取上清，加入1/10體積的NaAc，混勻，加入兩倍體積的預(yù)冷無水乙醇，混勻，-20度存放兩小時(shí)以上，1200rad/min 10min離心，75%乙醇清洗兩次，干了之后加入100ulQIAGEN試劑盒的bufferAE和1ulRNA酶，65度水浴溶解后跑膠。如果不用CTAB-free抽提，沉淀DNA的時(shí)候會(huì)析出大量白色膠狀沉淀，很像DNA，但是挑出清洗溶解后跑膠也是空白。材料用磨樣儀磨和液氮磨都試過。 |
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試下成都福際的試劑盒，他們家的試劑盒不比進(jìn)口的差 發(fā)自小木蟲Android客戶端 |
2樓2015-09-18 18:42:03
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3樓2015-09-29 16:41:31
漠筱禾
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4樓2015-10-05 11:26:52
jackyoung
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5樓2015-10-05 12:18:56
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后面的1200rad/min是打錯(cuò)了吧？12000？我建議你去cnki下載王軍的木本植物DNA提取，另外，你跑膠的loading buffer有問題沒？ 發(fā)自小木蟲Android客戶端 |
6樓2015-10-05 15:36:03
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7樓2015-10-08 12:57:07
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8樓2015-10-08 13:11:16
漠筱禾
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9樓2015-10-10 09:20:33
漠筱禾
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10樓2015-10-10 09:22:29
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