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哇哈哈lx銅蟲 (初入文壇)
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[求助]
變復(fù)性Ni柱純化蛋白，洗脫液（配方見下詳細(xì)說明）在4度會結(jié)冰了！ 已有4人參與
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變復(fù)性Ni柱純化蛋白，洗脫液（高濃度尿素，500mM咪唑，100mMNaCI，10%甘油，50Tris）在4度會結(jié)冰了！ 變復(fù)性Ni柱純化蛋白，洗脫液（高濃度尿素，500mM咪唑，100mMNaCI，10%甘油，50Tris）在4度會結(jié)冰了！ 蛋白高濃度尿素將蛋白變性后，與Ni柱binding后，需要洗脫，洗脫的Elute配方為：高濃度尿素，500mM咪唑，100mM NaCI，10%甘油，50mMTris-HCI PH8，。配好后的緩沖液放在4度，居然結(jié)冰了？求大神解釋原因？ buffer結(jié)冰了，對蛋白肯定有影響啊，雖然是已經(jīng)變性了的。 求各位幫幫忙，大神解釋一下。 |
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【答案】應(yīng)助回帖
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我是室溫純化的。而且用的是磁珠法。操作比較快速。問題是你認(rèn)為洗脫液結(jié)冰是尿素的問題嗎 你可以驗(yàn)證一下。洗脫液不加尿素洗脫是否結(jié)冰 ，還有我不知道你后續(xù)想做什么.尿素只是幫助維持蛋白的變性狀態(tài) 并不影響蛋白的洗脫，你可以繼續(xù)后續(xù)實(shí)驗(yàn)試試。還有為什么要變性兩次呢。如果胍鹽不結(jié)冰 兩次變性都用胍鹽不也一樣嗎。我一般上午將樣用尿素處理后放冰箱里 下午再進(jìn)行純化 完全沒有異常�？赡苣阍诒喜僮鳒囟忍� 時(shí)間又太久嗎。我確實(shí)沒遇到過這問題。 發(fā)自小木蟲IOS客戶端 |
7樓2015-10-17 10:49:55
2樓2015-09-21 11:12:47
喬丹希爾
金蟲 (著名寫手)
- 應(yīng)助: 25 (小學(xué)生)
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3樓2015-09-21 11:53:32
4樓2015-09-24 15:59:02
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