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Longnil新蟲 (小有名氣)
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農(nóng)藥降解菌陽(yáng)性克隆子的篩選及鑒定 已有1人參與
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農(nóng)藥降解菌陽(yáng)性克隆子的篩選及鑒定，這個(gè)試驗(yàn)是從今年年初就開始的，直到今天我才找到了陽(yáng)性克隆子并對(duì)其進(jìn)行鑒定。在此講述下我做實(shí)驗(yàn)的整個(gè)流程，給同方向的蟲友提供參考。 在陽(yáng)性克隆子的篩選上，我選擇了透明圈和抗生素兩個(gè)篩選標(biāo)記。起初野生菌在農(nóng)藥平板上透明圈上還是很明顯的，可將轉(zhuǎn)化子涂在農(nóng)藥板上根本分辨不出哪個(gè)菌落周圍是有透明圈的（要么全都像有透明圈，要么全都像沒(méi)有圈的），就這樣硬著頭皮做了十多次轉(zhuǎn)化后也沒(méi)找到有透明圈的轉(zhuǎn)化子。之后我改成了盲挑：將每個(gè)克隆子分別挑至3mL LB試管中并編號(hào)，培養(yǎng)好后十個(gè)為一個(gè)單位轉(zhuǎn)至10mL mm中做液體驗(yàn)證（例如將編號(hào)為1,2,3,4,5,6,7,8,9,10的菌液各取100微升離心后轉(zhuǎn)移至mm中驗(yàn)證是否能降解農(nóng)藥），如果某一瓶中農(nóng)藥被降解就分別對(duì)這10支試管中的菌液進(jìn)行液體驗(yàn)證這樣就可以找到具體是哪個(gè)菌液有降解效果，為進(jìn)一步驗(yàn)證其降解能力將有降解效果的菌液劃線至抗生素平板上（一定要加抗生素�。。�，挑取單菌進(jìn)一步驗(yàn)證其降解效果。另一方面，通過(guò)單酶切和雙酶切質(zhì)粒進(jìn)一步鑒定插入片段是否正確，最后送去測(cè)序。 在這個(gè)試驗(yàn)過(guò)程中我犯了一個(gè)很嚴(yán)重的錯(cuò)誤，導(dǎo)致試驗(yàn)拖延了兩個(gè)多月：克隆子培養(yǎng)過(guò)程中忘記加抗生素，導(dǎo)致在傳代驗(yàn)證過(guò)程中假陽(yáng)性克隆子的大量出現(xiàn)和菌液的污染，曾4次與陽(yáng)性克隆子擦肩而過(guò)（從做轉(zhuǎn)化開始到驗(yàn)證克隆子能否降解農(nóng)藥這個(gè)周期大概13天） 今年是我進(jìn)實(shí)驗(yàn)室的第三個(gè)年頭了，這三年中，我經(jīng)歷了很多次試驗(yàn)的失敗，這其中很大一部分是因?yàn)樵诿鎸?duì)試驗(yàn)結(jié)果時(shí)沒(méi)有做出正確的判斷沒(méi)把握好下一步的實(shí)驗(yàn)方向。三年中歷練了很多也成長(zhǎng)了很多，希望以后會(huì)更好。 |
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gc1016670506
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2樓2015-09-25 11:01:18
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