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江漓湄best金蟲 (小有名氣)
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[交流]
熒光定量PCR 預(yù)變性時(shí)間、加入引物的反應(yīng)體系保存 已有6人參與
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本人剛開始學(xué)習(xí)做定量PCR實(shí)驗(yàn)過程中遇到兩個(gè)問題： 1）使用的是TOYOBO SYBR 本來是95℃預(yù)變性1min,由于粗心，程序設(shè)定成95℃，10min，這么一來，對(duì)Ct值的影響大不大？需要重做嗎/ 2）將引物，SYBR，無酶水按比例配成反應(yīng)體系，能不能置于-20℃冰箱保存1-2天? 在網(wǎng)上瀏覽了下，說法不一，還請(qǐng)大神給出寶貴的知道意見，謝謝了！  |
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預(yù)變性十分鐘沒多大問題，混樣把引物和染料混一塊還是有點(diǎn)不妥。 發(fā)自小木蟲Android客戶端 |
江漓湄best
2樓2015-09-20 19:42:55
江漓湄best
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| 預(yù)變性10min?看你是什么酶，如果不是熱啟動(dòng)型的酶，那就有問題，酶活沒有保障，擴(kuò)增會(huì)有非特異性條帶，如果是熱啟動(dòng)酶或熱啟動(dòng)型的高保真酶就沒有問題，因?yàn)闊釂?dòng)酶的酶活需要預(yù)變性10min才能激活~下面那個(gè)最好不要混合放-20吧 |
7樓2015-09-22 09:44:55
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8樓2015-09-23 10:52:22
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