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配了一個(gè)PCR mix，當(dāng)天有結(jié)果，放-20度幾天之后，不能用了？
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最近PCR遇到一個(gè)奇怪的問(wèn)題，哪位幫我分析一下，不勝感激： 因?yàn)槊看蜳CR都要用到5*PCR buffer， 25mM MgCl2和10mM dNTP，所以配了一個(gè)400倍反應(yīng)體系的mix，當(dāng)天配完后，這個(gè)mix是好用的。然后我就把它存放在冰箱了（這個(gè)mix中沒(méi)放taq酶）�？墒菐滋旌�，用相同的模板，PCR儀，PCR程序，擴(kuò)了40多個(gè)樣本，結(jié)果只有一個(gè)樣本有條帶。我感覺(jué)PCR buffer， MgCl2和dNTP這三個(gè)混到一起不容易出問(wèn)題,完全可以配個(gè)mix儲(chǔ)存起來(lái)。是哪里出問(wèn)題了��？ |
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liyueyue: 金幣+5 2016-01-15 12:39:47
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他應(yīng)該想表達(dá)的是400倍反應(yīng)體積，50ul*400 發(fā)自小木蟲(chóng)Android客戶端 |
8樓2015-09-23 07:46:30
xiaoyanzi517
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liyueyue: 金幣+10 2016-01-15 12:38:47
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liyueyue: 金幣+10 2016-01-15 12:38:47
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我配1x，放-20℃，一個(gè)月都沒(méi)問(wèn)題。 應(yīng)該不是其中某一個(gè)試劑的原因，因?yàn)橛幸粋�(gè)樣本擴(kuò)出來(lái)了。 推測(cè)：1.是否是配置后液體不均勻，或者復(fù)融后沒(méi)有振蕩混勻所致。2.是否是DNA有問(wèn)題？3.如果某些不好擴(kuò)增的序列，或者引物不好，現(xiàn)配的mix效率更高 |
13樓2015-09-23 23:17:27
stone2239
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liyueyue: 金幣+5 2016-01-15 12:39:42
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liyueyue: 金幣+5 2016-01-15 12:39:42
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你這個(gè)現(xiàn)象確實(shí)有點(diǎn)奇怪，如果說(shuō)某種成分變了，應(yīng)該所有的都擴(kuò)增不出來(lái)，可你又有一個(gè)擴(kuò)增出來(lái)了。奇怪…… 我以前也會(huì)自己配mix，并且我從來(lái)都是把Taq酶也加進(jìn)去的，但從來(lái)沒(méi)有遇到過(guò)這種情況。 請(qǐng)問(wèn)你儲(chǔ)存在4℃還是-20℃？我存放在4℃，如果說(shuō)你存放在-20℃，有不有可能是沒(méi)有完全融化？導(dǎo)致這種結(jié)果？ 發(fā)自小木蟲(chóng)Android客戶端 |
7樓2015-09-23 07:42:32
asked6188
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10樓2015-09-23 21:12:35
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