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fuanxitan

鐵蟲 (小有名氣)

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專業(yè): 原子和分子物理

[交流] BioTechniques：2015最受歡迎的技術文章已有1人參與

1. Visual detection of isothermal nucleic acid amplification using pH-sensitive dyes

我們都曾在化學課上根據(jù)pH試紙的顏色判斷過溶液的酸堿度。NEB公司的研究團隊以同樣的理念（基于pH值的顏色改變）為基礎，開發(fā)了一種對pH敏感的變色染料，給DNA擴增賦予了肉眼可見的顏色改變。這一技術可以幫助人們直接用眼睛判斷核酸擴增的結果，不需要借助任何特殊設備，在野外研究、田間試驗、臨床診斷等領域有著廣闊的應用前景。

2. A single protocol for extraction of gDNA from bacteria and yeast

許多分子生物學技術都在被人們不斷優(yōu)化，比如PCR、質譜和測序。然而，DNA提取方法卻始終沒有什么太大的改變。

這項研究為人們展示了一種新的DNA提取方法。研究顯示，加熱乙醇堿性溶液，能以相似的效率釋放出細菌和酵母中的單鏈DNA。離心所得的DNA可以直接使用，也可以添加到硅膠柱進一步純化。這種快速、經(jīng)濟而且可靠的方法有助于鑒定未知的微生物，它不會忽視或偏向特定微生物。這種DNA提取方法能在25分鐘內處理各種生物樣品，可以用于臨床診斷或者生物醫(yī)學研究。（相關報道：BioTechniques：從細菌和酵母中提取gDNA的簡便方法）

3. Affinity proteomics to study endogenous protein complexes: Pointers, pitfalls, preferences and perspectives

蛋白常常通過相互作用來執(zhí)行細胞功能，特異性分離蛋白及其互作搭檔，對于解析細胞體系很有幫助。親和捕獲技術利用高親和力、高特異性的試劑，在細胞提取物中捕捉目的蛋白及其相關蛋白。將親和捕獲與質譜結合起來進行蛋白質組分析，可以分離和鑒定大量的內源性蛋白復合體。這篇文章闡述了親和捕獲蛋白復合體的有效步驟，探討了進行這類實驗的最佳方法和一些常見誤區(qū)。

4. CRISPR/Cas9 nuclease cleavage combined with Gibson assembly for seamless cloning

CRISPR-Cas9是細菌在漫長的進化史中演化出的重要防御機制。這個監(jiān)控體系能夠根據(jù)引導RNA的指示，靶標并降解入侵者的遺傳物質�，F(xiàn)在，CRISPR-Cas9已經(jīng)成為了炙手可熱的基因組編輯工具，幫助世界各地的研究者們解決實際問題。

克隆是基因工程的一個基本工具，這項研究將CRISPR–Cas9與Gibson assembly結合起來，開發(fā)了一種快速有效的無縫克隆技術。研究人員使用一個T7轉錄模板來生成引導RNA（sgRNA），靶標克隆載體上的特定位點。他們用這種sgRNA和Cas9切開了一個22 kb的載體，并通過Gibson assembly在其中插入一段DNA。研究表明，這是一個能夠實現(xiàn)無縫克隆的強大工具，可將DNA片段直接插入載體上的靶位點。

5. Preparation of amino acid mixtures for cell-free expression systems

這篇文章描述了一個為無細胞蛋白表達體系制備高濃度氨基酸混合物的有效方法。研究人員通過這一方法獲得了理想的氨基酸組成和生理性pH。這種方法速度快，容易操作，也比商業(yè)化試劑盒便宜。人們可以在此基礎上進行高通量實驗、無細胞代謝工程或者摻入非標準氨基酸。

6. Micropatterning strategies to engineer controlled cell and tissue architecture in vitro

微圖案化技術（Micropatterning）可在體外控制細胞和組織的構架，是模擬組織微環(huán)境的實用平臺。這篇綜述文章介紹了一些常用的微圖案化技術，可以引導新手找到適合自己的方法，幫助他們獲得自己想要的組織模式。文章還探討了微圖案化技術目前所面臨的一些關鍵性挑戰(zhàn)。

7. Simultaneous isolation of enriched myoblasts and fibroblasts for migration analysis within a novel co-culture assay

這一技術可以幫助人們在膠原酶消化之后，同時分離和富集成纖維細胞和成肌細胞。這些細胞隨后可用于一個共培養(yǎng)的創(chuàng)傷修復系統(tǒng)，為人們揭示成纖維細胞對成肌細胞遷移的影響。

8. High-throughput detection of DNA double-strand breaks using image cytometry

這項研究為人們展示了一個高通量的方法，用圖像細胞分析技術（image cytometry）客觀地研究DNA雙鏈斷裂的細胞修復機制。

9. Abridged adapter primers increase the target scope of Hi-Plex

Hi-Plex是一種以擴增子為基礎的靶向性大規(guī)模平行測序技術。研究人員對Hi-Plex方法進行了改良，使其可以靶標更多的擴增子（16–1003）。他們還用截短的接頭引物來替代全長的接頭引物，成功減少了之前的脫靶效應。

10. Introduction of the hybcell-based compact sequencing technology and comparison to state-of-the-art methodologies for KRAS mutation detection

這項研究將基于hybcell的測序技術用于KRAS突變分析，并將這種方法與Sanger測序、焦磷酸測序和二代測序進行了比較。研究指出，以hybcell為基礎的測序技術很適合在腫瘤樣本中檢測KRAS點突變。

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1樓 2015-09-30 12:19:18

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liu_yanpeng

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專業(yè): 生物醫(yī)用高分子材料

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2樓2016-01-29 13:30:12

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