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梁育松木蟲 (小有名氣)
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[求助]
做大批量PCR，cDNA過(guò)一段時(shí)間就擴(kuò)不出來(lái)了，是怎么回事 已有1人參與
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| 做大批量半定量PCR前，我用actin做了循環(huán)數(shù)探索，最終確定用26個(gè)循環(huán)，并將16個(gè)cDNA擴(kuò)增后調(diào)亮度到一致。然后一直用26個(gè)循環(huán)做目的基因擴(kuò)增。一星期后，發(fā)現(xiàn)擴(kuò)不出任何條帶。再次做循環(huán)數(shù)探索，發(fā)現(xiàn)要34個(gè)循環(huán)才有電泳條帶，然后又得調(diào)亮度，好麻煩。我想問(wèn)，為什么循環(huán)數(shù)會(huì)變化呢？我需要做大量的PCR，如果cDNA老變化，這樣不停地探索最佳循環(huán)數(shù)，調(diào)亮度會(huì)非常耗時(shí)間，影響實(shí)驗(yàn)進(jìn)度，大家有什么好的解決辦法嗎? |
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njuzhangxin
鐵桿木蟲 (小有名氣)
- 應(yīng)助: 12 (小學(xué)生)
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- 蟲號(hào): 923947
- 注冊(cè): 2009-12-09
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- 專業(yè): 植物保護(hù)生物技術(shù)
2樓2015-11-02 16:06:28
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