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Deng_Cheng鐵蟲 (小有名氣)
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[求助]
原核表達(dá) 已有3人參與
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我在做咖啡堿合成途徑中AMP脫氨酶的原核表達(dá)，ORF 為2571bp，現(xiàn)已連接pmal-c5x，轉(zhuǎn)化到novablue(DE)，這個感受態(tài)是借來的，他們說pmal質(zhì)粒用這個好。于是我采用他們的最佳誘導(dǎo)條件：28度24h。但結(jié)果好像不理想。 由于我是新手，想問以下問題： 1. 表達(dá)菌株相同而目的基因不同， 最佳誘導(dǎo)條件是否相同？如果同一個目的基因使用了不同的表達(dá)菌株，是否相同呢？ 2.怎么選擇最佳表達(dá)菌株，主要看哪幾點？ 發(fā)自小木蟲IOS客戶端 |
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a86052
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2樓2015-10-12 15:26:04
3樓2015-10-12 15:45:22
Deng_Cheng
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4樓2015-10-12 16:23:24
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，可以看看是否有稀有密碼子什么的。但是這個蛋白已經(jīng)不小，大標(biāo)簽的載體可能表達(dá)效果不好。還是那句話，這個沒固定的，多嘗試才行 5樓2015-10-12 16:50:33
惡魔的左眼
木蟲 (正式寫手)
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【答案】應(yīng)助回帖
★ ★ ★
感謝參與，應(yīng)助指數(shù) +1
Deng_Cheng: 金幣+3 2015-10-19 15:11:47
感謝參與，應(yīng)助指數(shù) +1
Deng_Cheng: 金幣+3 2015-10-19 15:11:47
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一般來說，我們會很據(jù)基因的情況去查一些資料，然后對該基因分析并優(yōu)化。 目的基因不一樣，一般來說誘導(dǎo)表達(dá)的條件也不一樣，與宿主細(xì)胞的關(guān)系不算太大 表達(dá)最佳菌株重點有很多，但比較主要的是誘導(dǎo)表達(dá)條件的篩選，一般的蛋白表達(dá)純化對于表達(dá)條件都需要進(jìn)行梯度篩選，摸索最優(yōu)表達(dá)情況，這個最麻煩了。。。 |
6樓2015-10-12 17:07:54
【答案】應(yīng)助回帖
商家已經(jīng)主動聲明此回帖可能含有宣傳內(nèi)容
★
Deng_Cheng: 金幣+1 2015-10-19 15:11:59
Deng_Cheng: 金幣+1 2015-10-19 15:11:59
| 建議送到公司來做，比較快。儀器設(shè)備和人員都比較成熟。供參考：http://www.tolobio.com/service_detail.php?id=154 |
7樓2015-10-15 12:37:18
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