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81631731金蟲 (小有名氣)
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[求助]
含過表達(dá)WNT基因的慢病毒轉(zhuǎn)染hMSC熒光很弱 已有1人參與
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最近在轉(zhuǎn)過表達(dá)的WNT9A的慢病毒到hMSC，第一次設(shè)定MOI為50,100,150，作用24h換液，發(fā)現(xiàn)熒光很弱，于是將MOI翻倍補(bǔ)加慢病毒。48h后熒光還是很弱，而且轉(zhuǎn)染率也很低。但是細(xì)胞也長(zhǎng)滿了就接著往下傳代，熒光依然較弱。后來放假就么有管了，等節(jié)后看看貌似熒光率有上升，但是細(xì)胞推擠厲害狀態(tài)不好，沒有接著往下傳代（當(dāng)時(shí)真應(yīng)該再試試的......），而且把曝光時(shí)間調(diào)長(zhǎng)一點(diǎn)貌似也還行（因?yàn)楫?dāng)時(shí)還轉(zhuǎn)了eGFP，所以心里就默認(rèn)那個(gè)熒光強(qiáng)度才是正常的，這也是考慮不周全的地方）。但是后來又重復(fù)了一下MOI，同時(shí)領(lǐng)導(dǎo)說作用時(shí)間太長(zhǎng)影響細(xì)胞狀態(tài)，所以又試著將作用時(shí)間改為8h，完全沒有熒光啊啊�。。�！ 同批轉(zhuǎn)染含eGFP的慢病毒，MOI為50熒光率達(dá)100%，而且熒光很亮。 請(qǐng)問這是什么問題？病毒的滴度是10^8數(shù)量級(jí)，但是為什么轉(zhuǎn)染效率這么低呢？？？ 求大神賜教�。�！ |
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2樓2017-06-27 10:56:47
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