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內(nèi)源mRNA與外源mRNA的識(shí)別
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做誘導(dǎo)iPS的實(shí)驗(yàn),重編程之后用RT-PCR檢測(cè)內(nèi)源和外源SOX2和OCT4的表達(dá)情況 這里是怎么識(shí)別mRNA是外源基因轉(zhuǎn)錄出來(lái)的還是內(nèi)源基因轉(zhuǎn)錄出來(lái)的呢? 文獻(xiàn)是Okita用Episomal plasmid轉(zhuǎn)染的那篇,我上傳到附件里了 文獻(xiàn)里提到的是用特異性的primer來(lái)識(shí)別內(nèi)源或外源的,但是也只是一句話提到。。。 自己也做過(guò)一些搜索,看到說(shuō)在目的基因加上tag可以區(qū)別內(nèi)源或外源,但是個(gè)人理解這個(gè)tag主要是在蛋白水平的識(shí)別,去Addgene上查了一下,這3個(gè)質(zhì)粒都沒(méi)有tag 自己想了一下,要利用內(nèi)源轉(zhuǎn)錄的mRNA和外源轉(zhuǎn)錄的mRNA序列上的差異來(lái)設(shè)計(jì)引物 但是表達(dá)的蛋白是一樣的,那CDS區(qū)域應(yīng)該是一樣的,所以有差別的可能是UTR區(qū)域 不知道這個(gè)想法對(duì)不對(duì) 因?yàn)槟壳巴耆珱](méi)有接觸過(guò)實(shí)驗(yàn),所以雖然是個(gè)簡(jiǎn)單的問(wèn)題但是不太明白,搜索也不太能找到方向 希望各位版友不吝賜教 謝謝 |
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