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15853830932木蟲 (小有名氣)
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[交流]
膠回收 已有9人參與
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請(qǐng)問一下，我用的axygen膠回收試劑盒，回收后做基因重組，一直不成功。是不是回收試劑盒里的試劑對(duì)核酸有影響？我猜測(cè)可能是有附著物之類的，使得重組酶結(jié)合不上去。不知哪位大神分析一下。。。 發(fā)自小木蟲Android客戶端 |
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xiaodi1989
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西門吹雪170: 金幣+3, 鼓勵(lì)回帖交流 2015-10-18 17:10:02
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我以前用qiagen的膠回收也有過類似的情況。推測(cè)的原因一是回收率過低，二是回收過程對(duì)片段末端有損傷。我現(xiàn)在只要目的片段比較單一，我就不叫回收，使用fermentas的fast digest酶切片段和質(zhì)粒，在用fastap給質(zhì)粒去磷酸化，然后連接。因?yàn)閒ermentas的buffer是單一的，所有酶只需要熱滅活既可，省時(shí)簡(jiǎn)單。 最近的一次使用膠回收是因?yàn)槲矣玫膐verlapping pcr，條帶很雜。我用的是sigma的盒子，一次就連上了，克隆數(shù)也比較多。 祝你實(shí)驗(yàn)順利。 |
2樓2015-10-15 10:09:35
15853830932
木蟲 (小有名氣)
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3樓2015-10-16 08:33:24
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如果是從正規(guī)渠道買的提取試機(jī)盒的話，你沒必要懷疑商業(yè)化試劑盒有問題，如果那么大牌子的核酸提取試機(jī)盒里有對(duì)核酸形成影響的試劑的話，那axygen可以考慮退出分子生物學(xué)領(lǐng)域了 發(fā)自小木蟲Android客戶端 |
4樓2015-10-16 09:37:48
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jzhwang2007
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8樓2015-10-17 10:14:48
9樓2015-10-18 16:01:49
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10樓2015-10-19 12:49:36
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