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北京石油化工學(xué)院2026年研究生招生接收調(diào)劑公告

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jiangpozi

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[求助] 求大神看下質(zhì)粒雙酶切圖已有7人參與

pci-neo質(zhì)粒用XBaI 和ECORI 雙酶切，左邊三個(gè)是沒有酶切的質(zhì)粒，右邊第一個(gè)是和第三個(gè)用的是buffer 4 第二個(gè)用的是buffer1 ，這個(gè)圖有沒有切開啊？哪個(gè)切開了呢？求大神分析下，要怎么改進(jìn)呢？

質(zhì)粒pcineo 酶切 9.14.jpg

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1樓 2015-10-15 10:28:06

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回帖支持 ( 顯示支持度最高的前 50 名 )

han3028730

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【答案】應(yīng)助回帖

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myprayer: 金幣+1, 贈(zèng)人玫瑰，手有余香，分子生物期待您更多精彩。 2015-10-15 18:14:06

請問Marker是多大的？Marker沒怎么分開。不能判斷各個(gè)條帶有多大。
個(gè)人感覺用buffer4的切開了，產(chǎn)生了較大和較小的兩條帶，而用buffer1的似乎是單酶切產(chǎn)物，不知道理論上雙酶切之后的兩條帶和用buffer4的兩條帶是否一致。

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3樓2015-10-15 10:44:02

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tolobio

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引用回帖:

2樓: Originally posted by jiangpozi at 2015-10-15 10:38:44
求助�。。。。。。。。�！

質(zhì)粒構(gòu)建，現(xiàn)在已經(jīng)比較成熟了。建議送到公司去做比較方便，質(zhì)量、速度還有保證，價(jià)格也不貴。
http://www.tolobio.com/service_detail.php?id=110

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7樓2015-10-15 12:07:21

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云中子2014

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我看了你的圖，照你提供的資料，第一可能片段內(nèi)部還有你使用的酶切位點(diǎn)。第二，你是用的酶看看是不是有星號(hào)活性。另外重新跑一個(gè)陽性對照排除一下酶的問題。

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科研路上無坦途

13樓2015-10-16 19:47:01

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chenyhok1987

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建議使用NEB公司的HF酶，很多通用BUFFER，而且也不用擔(dān)心切得時(shí)間久而糊掉的，另外任何內(nèi)切酶來切割都不能全部切點(diǎn)，切膠回收時(shí)候也可以讓膠多跑一會(huì)，可以很好的線性分離回收，祝好~~~

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平生多磨礪，男兒自橫行！

14樓2015-10-17 16:32:09

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jiangpozi

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求助�。。。。。。。。�！

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2樓2015-10-15 10:38:44

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Eternity宇

禁蟲 (著名寫手)

本帖內(nèi)容被屏蔽

4樓2015-10-15 11:22:42

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引用回帖:

3樓: Originally posted by han3028730 at 2015-10-15 10:44:02
請問Marker是多大的？Marker沒怎么分開。不能判斷各個(gè)條帶有多大。
個(gè)人感覺用buffer4的切開了，產(chǎn)生了較大和較小的兩條帶，而用buffer1的似乎是單酶切產(chǎn)物，不知道理論上雙酶切之后的兩條帶和用buffer4的兩條帶是 ...

200bp marker 。buffer4 的下面較小的條帶是800bp的，為什么有這么個(gè)條帶呢？

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5樓2015-10-15 11:23:46

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4樓: Originally posted by Eternity宇 at 2015-10-15 11:22:42
一般切開了都會(huì)產(chǎn)生兩條不同的帶的，酶的話不是有自己建議的Buffer嗎？建議用推薦的Buffer來做

我只是質(zhì)粒雙酶切，兩個(gè)酶切位點(diǎn)只有20bp左右，為什么會(huì)有800bp左右的帶呢？而且上面的主帶上好像也有幾條帶在一起？是為什么呢？

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6樓2015-10-15 11:26:54

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EasternCocoo

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用的marker不對啊，弄個(gè)大點(diǎn)的marker，還有理論上你切完應(yīng)該得到多大的條帶，你要分析下啊，用VectorNTI分析下，然后再對照膠圖看下，就知道切開沒有�。�

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8樓2015-10-15 16:01:19

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如果兩個(gè)酶切位點(diǎn)之間的片段大小只有20 bp的話，那幾乎就類似于線性化了，不過你要確定你質(zhì)粒上的這兩個(gè)酶切位點(diǎn)都是唯一的才行，而且切開后，理論上線性的質(zhì)粒要跑得比較慢，所以條帶可能會(huì)比原始質(zhì)粒高一點(diǎn)。

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9樓2015-10-15 16:08:08

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還想冒昧問下，能否給點(diǎn)你現(xiàn)在做的這個(gè)PCINeo質(zhì)粒呢，我現(xiàn)在的課題剛好要用到這個(gè)質(zhì)粒，但是如果購買的話，從promega公司采購貨期將近1個(gè)月，時(shí)間太久，實(shí)驗(yàn)耽誤不起，所以挺急的，以后如果有什么需要的質(zhì)�；蚓�，只要我能幫上忙的，都可以商量提供的，謝謝��！

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10樓2015-10-15 16:11:55

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