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[求助]
大神幫忙看，SDS-PAGE檢測(cè)此重組表達(dá)蛋白（酶）基本都在沉淀里，上清會(huì)否有酶活？ 已有4人參與
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請(qǐng)大神幫我看看，第一條帶是marker，第二三四條帶分別是空載體的全菌上清沉淀，后三條帶，分別是 重組蛋白破碎后的全菌 上清 沉淀。我感覺(jué)蛋白都在沉淀里，基本上清理完全沒(méi)有，我表達(dá)的是一個(gè)酶，但是理論上上清里應(yīng)該也是含有的啊，但是我沒(méi)有檢測(cè)到活性，大家遇到這種情況都是怎么做，用上清還是包涵體復(fù)性？ 未命名圖片.png |
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9樓2015-10-22 19:15:43
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【答案】應(yīng)助回帖
感謝參與，應(yīng)助指數(shù) +1
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你這張圖說(shuō)明你這個(gè)酶是胞內(nèi)且不可溶或者包涵體過(guò)分表達(dá)。你用上清并不起任何作用。我建議你低溫誘導(dǎo)，比如16度。這樣有可能不會(huì)過(guò)分折疊�？赡軙�(huì)出現(xiàn)在上清中。 發(fā)自小木蟲(chóng)IOS客戶端 |
2樓2015-10-17 09:12:26
Stridegogogo
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3樓2015-10-17 14:38:36
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【答案】應(yīng)助回帖
★ ★ ★ ★ ★
Stridegogogo: 金幣+5, ★有幫助 2015-10-20 11:54:36
Stridegogogo: 金幣+5, ★有幫助 2015-10-20 11:54:36
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換一個(gè)宿主細(xì)胞再試試。如果還是不行，就得嘗試換載體，或者嘗試包涵體復(fù)性吧。 發(fā)自小木蟲(chóng)IOS客戶端 |
4樓2015-10-17 22:14:46
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