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hhl1230新蟲 (小有名氣)
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---為什么的WB條帶是這樣？求各位大神指點�。。。�！
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 大家?guī)臀铱纯矗瑸槭裁次业臈l帶是這樣的。總共上傳了三次WB結(jié)果，三次實驗條件基本相同（其中第二次內(nèi)參一抗為1:1000，第三次內(nèi)參一抗1:500）。簡單說一下我的實驗條件:1、電泳：上樣量25ul，其他的我都是看電泳跑得到底就停下了。 2、轉(zhuǎn)膜：50mA，25min;（內(nèi)參和目的蛋白分子量只差幾KDa，用一樣的轉(zhuǎn)膜條件）; 2、封閉：37°搖床（150r/min）封閉3h； 3、一抗：1:1000（目的蛋白），1:500（內(nèi)參），4度冰箱孵育過夜，TBST洗三次，每次10min； 4、二抗：1:1000,37°搖床（150r/min）孵育2h，TBST洗三次，每次10min，再TBS洗2次，每次5min； 5、曝光 備注：封閉時間二抗?jié)舛�、�?nèi)參濃度是實驗室摸索好的。 請各位大神、以及有相同經(jīng)驗的親們指點，謝謝啦~ 第一次（目的蛋白1）.jpg 第二次（內(nèi)參）.jpg 第三次（內(nèi)參）.jpg 第三次（目的蛋白1）.jpg |
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