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liubolin945鐵蟲 (小有名氣)
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[求助]
3'RACE，PCR的問題，Oligo（dT）
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請教大家點問題。 有303bp的片段，要做3’race，用Oligo dT進行反轉(zhuǎn)錄之后再進行巢式PCR，但是效果不理想。 做了一個梯度PCR，因為特異性引物都是Tm都是56，而Oligo dT是44，差太多，我不知道怎么確定退火溫度，所以做了一個梯度。 左側(cè)是outerPCR，右側(cè)是用對應的Outer PCR產(chǎn)物稀釋后進行的Inner PCR。 為什么會彌散�。窟@個彌散位置是有條帶嗎？ 怎么解決oligo退火溫度低的問題啊？ 謝謝大家 |
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2樓2020-08-25 16:30:33
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