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[求助]
跪求！克隆基因啟動(dòng)子，用HI-TAILPCR測(cè)序多次結(jié)果都是非目的條帶，請(qǐng)教各位大神原因！
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先克隆了該基因的cDNA獲得全長(zhǎng)，然后克隆了該基因內(nèi)含子，就中間不到200bp一段，跟擬南芥該基因一樣，然后根據(jù)內(nèi)含子前面500bp設(shè)計(jì)反向互補(bǔ)引物3條，間隔100左右，根據(jù)文章中要求，后兩條計(jì)算后TM值均在68℃以上，tail的體系程序完全用的都是文章中的，引物是英濰捷基（上海）合成的，酶用的是詮釋金的高保真的Pfu酶�？寺�1年了，先前用的是武漢的FPNI-PCR方法，跟HI-TAIL原理類似，結(jié)果也都是非特異性條帶，然后用HI-TAIL，結(jié)果也是非特異，想問下各位大神到底是哪里的問題！本人也是著急畢業(yè)�。�！跪謝�。�！ （附：圖片3個(gè)為一組，分別是2輪產(chǎn)物，3輪產(chǎn)物，和3輪普通PCR結(jié)果，選了紅框里大于1000的條帶，測(cè)序結(jié)果，還是非目的性條帶。） 本人新蟲，攢了兩天，一共只能拿出7個(gè)金幣，對(duì)不住大家了��！ 每3個(gè)一組，分別是2輪，3輪，和普通pcr3輪 |
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4樓2016-04-19 15:53:44
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如果選擇條帶，測(cè)序，選擇第三輪產(chǎn)物比第二輪的小的去測(cè)序。確定三條特異引物沒問題？takara的ex酶效率高些，好多tail-pcr文章都提到這個(gè)酶。稀釋倍數(shù)建議50倍 發(fā)自小木蟲Android客戶端 |
2樓2015-10-30 13:09:32
3樓2016-04-19 15:53:24
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