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小木蟲論壇-學術(shù)科研互動平臺 » 生物醫(yī)藥區(qū) » 生物科學 » 蛋白/酶 » 牛精子蛋白提取
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zyf902527新蟲 (初入文壇)
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[求助]
牛精子蛋白提取
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最近在做二維電泳，在裂解蛋白時出了問題：（1）用尿素鹽酸胍的方法裂解牛精子，沉淀蛋白不溶解，尿素裂解液（7M的尿素、2M硫脲、4%CHAPS、1mM EDTA、65mM DTT），2M的鹽酸胍(1.9g鹽酸胍、0.05g Tris、1mM EDTA、10ml蒸餾水)，溶解蛋白的溶解液是和尿素裂解液一樣。 （2）用TCA-丙酮沉淀后的牛精子蛋白，蛋白呈黃色的，也是不能完全溶解，溶解液也是用尿素裂解液。 我在網(wǎng)上看到有用超聲助溶的，加熱的25℃過夜的，往TCA-丙酮沉淀后的牛精子蛋白里加上0.2M的氫氧化鈉1ul,或往尿素鹽酸胍裂解的沉淀蛋白里加β-ME，都試過了，還是不見蛋白溶解，這是怎么回事呀？ 急求各位師姐師兄的幫助，謝謝！ |
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zyf902527
新蟲 (初入文壇)
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- 性別: MM
- 專業(yè): 蛋白質(zhì)組學
3樓2016-03-02 11:52:08
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