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[求助]
大腸桿菌red重組，kan抗性去不掉？？？？ 已有1人參與
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用HCB1645大腸桿菌，先化轉(zhuǎn)pkD46（Amp），后電轉(zhuǎn)pkD13上的一個kan抗性片段，成功，確認(rèn)pkD46 Amp的抗性已沒有后（由于后面要轉(zhuǎn)導(dǎo)的pcp20也帶有Amp抗性），再化轉(zhuǎn)pcp20（Amp和Cam），在30度恒溫箱下用Amp盤，培養(yǎng)菌種，成功長出菌落，認(rèn)為pcp20也化轉(zhuǎn)成（同時在此過程中，kan的抗性由于pcp20的導(dǎo)入，被刪除）。接下來純化，挑選之前Amp盤上長出的pcp20的菌落在37攝氏度下用空盤純化（由于pcp20是溫感型，此步驟可以去除pcp20質(zhì)粒，即去除Amp抗性）。再從空盤上挑選菌點同時分別在空盤、Amp、Kan盤上劃點，在37度下培養(yǎng)，選取能在空盤上長，但不能再Amp和Kan上長的菌落，作為所要研究的菌種（這是為了驗證之前所做的步驟，菌種的抗性是否被刪除）。 但是，在最后一個步驟上出了問題。從空盤上挑選菌點分別在空盤、Amp、Kan盤上劃點后，空盤上全部都長，Amp全部不長，Kan盤上全部都長，說明kan的抗性沒去掉，這是為什么？？？ 求賜教，謝謝~~~ [ 發(fā)自手機版 http://www.gaoyang168.com/3g ] |
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