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[求助]
做RFLP-PCR，PCR階段P不出條帶,急急急！求助大神！ 已有1人參與
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各位前輩大家好，我最近在做RFLP-PCR，實(shí)驗(yàn)出了點(diǎn)問題，由于專業(yè)不是分生的，所以請教一下各位前輩。 血液基因組提取DNA，PCR，內(nèi)切酶酶切，這是我的大概過程。 今天剛開始做一個(gè)新位點(diǎn)，PCR未p出條帶。 分析：1、DNA模板應(yīng)該沒有問題，之前已經(jīng)順利做完一個(gè)基因位點(diǎn)； 2、引物是按要求溶解稀釋的 3、PCR退火溫度是58℃，大概過程是94-5min，35循環(huán)（94-35s，58-30s，72-20s），72-5min。 4、有同學(xué)說可能是擴(kuò)增片段里GC含量高所致。 跪求各位前輩指點(diǎn)一下，可能是什么原因，該怎么改進(jìn)實(shí)驗(yàn)條件。萬分感謝！  附上我的序列和引物，（A）為突變堿基位置，前輩們幫忙看看，問題到底出在哪？謝謝了。 序列：GATTAGCCTGGGCAACATAGGGAAACCCCGTCTTTCAAAAAAAAAAAAAAAGAAGAAGAAAAAGGAAAGAAAAACACAAAAAGTGCTGGGATCACAGGTGTGAGCCACTGCGCTCAGCCCCTTTCTGTTTCTTTTTGTGATCCTCCCAACCCTCTTCTCCCTCTGAATCTGTCTCTGGGACTGTCTCTGTCTCCCCGTCTTCCCTCCCTTCCTCACCCTGTCTATCTCTCTCTGTATGTCTCTTGGTGTGTGTGTCTCTCTCGATGTTTTTCTCTCTGCCTGTCTGCCTGTCTGTACCCCTCTGCGTCTCTCCCCGCCCCCATCCGTCTGTGTCGCACGCGCACCCCCATCGGGCTTCTGCTCTTGTCAATTGCCCCTGGGGCCCTGCCCCCACCTCCGCCCCAGTTTCCTTCTACAAGCCTCAGTCTCCAGCTTTGAAAACTGGGCAGGCGTCCCCCCATCCGCACCCCCACCCCTTCCCCACGCATTCCCCGCTCGGTC（A）CGGCTGTCCACCGGCCAAGCTCAGGCGCGTCCTGGCCCAGGGCCGGGCGGAAGGGAACCAGTCCAGGGCCAGCCAGGCTGCGCCGGGGGCGCGCGTCCGGGAAGCGCCCCTCCTGCCCCGCCCCCGGCCCCGGCCCCGGCCCCGCCCCGTGCTTGCAGTTTCCTATAAGTAGCCGGCTCTCGGTGCCAGCCTCAGCCTGACTTCAGCGCTCCCACTCTCGGCCGACACCCCTCATGGCCAACCGTTACACCATGGATCTGACTGCCATCTACGAGGTGAGTCCCCGCCGCACGGCATCCCCGGTACCTGCATGCCTGAGTCCGAGTCCCCACCTCTCTAGCGCCGCAAACTCCAGCCCGGGACGCTTGCCTCCCTTCTCCAACTGGGGCTCCCTAGCGCCGCGCCCTCCAGCCTGGGGCCCCTGCCTCCCGCTCAGACCAGCTTGGT 引物：F:TCGGGCTTCTGCTCTTGTCAAT R：GCACCGAGAGCCGGCTACTTAT ZFP1.jpg |
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潘meiqiao
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2樓2015-11-26 09:31:38
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